Podstawowe techniki histologiczne

:

1. mikroskopia świetlna jasnego pola:

- trwałe, barwnione preparaty histologiczne,
- barwne reakcje histochemiczne lokalizujące

w wyspecjalizowanych komórkach:

a) związki organiczne (cukrowce,

tłuszczowce, aktywne enzymy),

b) gromadzone związki mineralne,

2. mikroskopia świetlna kontrastowo-

fazowa.

3. mikroskopia świetlna fluorescencyjna.
4. mikroskopia elektronowa transmisyjna i

skaningowa.

5. techniki specjalne:

autoradiografia,
hodowle komórek i tkanek.

Podstawowe techniki histologiczne:

1. przygotowanie trwałego preparatu do
obserwacji komórek i tkanek w mikroskopie
świetlnym.

Mieszaniny dobrze utrwalające struktury

komórkowe:

Utrwalacze złożone formalinowe:
1. Płyn Bouin

15 ml nasyc. roztworu wodnego kwasu

pikrynowego

5 ml formaliny (40% formaldehyd)
1 ml kwasu octowego lodowatego.

2.

Płyn Bakera (Fo-Ca)

10 ml 10% chlorku sodu
10 ml formaliny

80 ml woda destylowana.

Utrwalacze złożone nie zawierające formaliny:

1. Płyn Flemminga

15 ml 1% kwasu chromowego,

4 ml 2% czterotlenku osmu
1 ml kwasu octowego lodowatego.

Bardzo dobrze utrwala krwinki, organele (mitochondria),
ziarnistości cytoplazmatyczne.

Mikrotom

Bloczek z zatopionym materiałem tkankowym

Mięśnie poprzecznie prążkowane ssaka

Komórki nerwowe piramidalne z kory mózgowej człowieka

Przekrój przez osteony kości zbitej ssaka

• 2. Reakcja histochemiczna PAS

• Reakcja PAS ujawnia w preparatach tkankowych grupy

aldehydowe wielocukrowców na drodze reakcji barwnej z
kwasem fuksynosiarkowym obecnym w odczynniku Schiffa
(zabarwienie czerwone). W reakcji wykorzystuje się hydrolizę
węglowodanów kwasem nadjodowym przekształcającej grupy
1,2 glikolowe cukrowców w grupy aldehydowe. Kwas
nadjodowy zatrzymuje reakcję utleniania na etapie powstania
aldehydów i dalsze utlenianie nie prowadzi do powstania grup
karboksylowych.

3. Autoradiografia

Metoda autoradiograficzna wykorzystuje substraty

metaboliczne znakowane nuklidami promieniotwórczymi.
W badaniach biologicznych wykorzystuje się emitery β o
niskim poziomie

energii. W badaniach cyklu komórkowego

(np. wykrywanie poliploidalności komórek)
stosuje się jako prekursor jądrowy tymidynę
znakowaną trytem H-3.