Podsumowanie ćwiczenia 8

Testy wykrywania mutagenów

środowiskowych

NQO

DMS

Ćwiczenie 9

Polimorfizmy genów naprawy DNA

RAR

N

N

H

O

N

N

O

dRTP

NH

2

Go

A

G

C

Go

C

8-oxo-
dGMP

MTH1

Oxidative

DNA

damage

A

OGG1

C

NEIL1

Go

C

G

A

T

Damage

repaired

Damage

repaired

BER

BER

Go

or

DNA pol

AP

AP

Replication

OGG2

Go

A

Go

AP

A

MYH

MMR

MMR

TCR

BER

GGR

RAR

T

A

Replication

Mutation

Szlaki naprawy 8-oksyguaniny w komórkach

ssaków

Niektóre polimorfizmy genów naprawy DNA

systemu BER

Gen

Zmiana

genetyczna

Zmiana aktywności

enzymatycznej

Ryzyko

wystąpienia

nowotworu

OGG1 Ser326Cys

wycina 8-oksyG in vitro

2-6 razy mniej

efektywnie niż wariant

podstawowy 326 Ser

Płuca,

prostaty,
nosogardzieli

OGG1 Arg154His

Obniżona aktywność,

charakter mutatorowy,

wycina 8-oksyG niezależnie

od zasady leżącej naprzeciw

w nici komplementarnej

w nowotworze

trzustki, ryzyko

nieokreślone

XRCC1 Arg289His

Arg399Gln

Białko platformowe, brak

aktywności

enzymatycznej

Płuca, piersi

MYH

Gly328Asp
Tyr165Cys

obniżają aktywność

glikozylazy wobec pary
8-oksyG:A

Jelita grubego

MYH

Tyr90/stop
Glu466/sto

p

Skrócone białka

Jelita grubego i

okrężnicy

Wykonanie ćwiczenia:

PCR genów OGG1 i XRCC1 do oznaczenia polimorfizmów

przy pomocy RFLP.

1. Cięcie restryktazą i elektroforeza agarozowa – każda

grupa robi jedno DNA: (i) własne oraz (ii) od
pacjentów o różnym genotypie, np. Ser326Ser,
Cys326Cys, Ser326Cys

3. Dializa przygotowanych uprzednio produktów PCR (ok.

140 bp.)

4. Elektroforeza kapilarna.