Metody badań
mikroskopowy
ch

FISH 

Fluorescencyjna hybrydyzacja jest
techniką służącą do wykrywania w
badanym materiale genetycznym
określonej sekwencji DNA za pomocą
fluorescencyjnych sond DNA. W celu
analizy badanego materiału konieczne jest
użycie mikroskopii fluorescencyjnej.
Technika FISH może być wykorzystana do
badania wielu typów komórek i tkanek.

Najczęściej odpowiednie
przygotowanie komórek do badania
polega na usunięciu cytoplazmy i
utrwaleniu jąder komórkowych na
szkiełku podstawowym.
Fluorescencyjna sonda jest nanoszona
na preparat i całość podawana jest
krótkotrwałej denaturacji w
podwyższonej temperaturze, a
następnie kilkugodzinnej
hybrydyzacji. Kolejnym etapem jest
usunięcie nadmiaru
niezhybrydyzowanej sondy przez
kilkukrotne odpłukanie preparatu i
uwidocznienie jąder komórkowych
barwnikiem specyficznym dla DNA.
Tak przygotowany preparat można
analizować pod mikroskopem
fluorescencyjnym

Dapi

Organiczny związek chemiczny, stosowany
jako barwnik fluorescencyjny silnie wiążący się do DNA.
Powszechnie używany do wybarwiania jąder
komórkowych lub chromosomów w mikroskopii
fluorescencyjnej.  Ponieważ DAPI przenika przez
nienaruszone błony biologiczne, może być używany do
wybarwiania zarówno żywych komórek jak i utrwalonych.
W mikroskopii fluorescencyjnej DAPI jest wzbudzany
światłem ultrafioletowym. Ponieważ DAPI wiążę się bardzo
ściśle z DNA na zasadzie interkalacji i tym samym zaburza
jego strukturę, związek ten jest toksyczny i mutagenny.
Przy pracy z DAPI powinno się zachować szczególną
ostrożność.

Dapi

SYBR Green

Jest barwnikiem fluorescencyjnym .
Niezwiązany SYBR Green po wzbudzeniu
emituje słabą fluorescencję, której
intensywność zostaje zwiększona o kilka
rzędów wielkości po związaniu się
barwnika z dwuniciowym DNA.