Obliczenia stężenia 

DNA i RNA w 

wyizolowanej próbie na 

podstawie pomiaru 

spektofotometrycznego

Spektrofotometria, jest to technika 

pomiarowa polegająca na ilościowym 
pomiarze transmisji lub odbicia 
światła przez próbkę.

Po skończonej izolacji kwasów 

nukleinowych istotna jest wiedza 

o tym, jakie jest stężenie i 

czystość materiału przed 

wykonaniem jakichkolwiek badań.

W pomiarach spektroskopowych zasadnicze znaczenie ma znajomość stężeń molowych kwasów

nukleinowych. Stężenie można otrzymać z pomiaru absorpcji przy długości fali

λ = 260 nm (maksymalna absorpcja promieniowania nadfioletowego przez DNA), jeżeli znamy 

molowy

współczynnik ekstynkcji ε

Z poniższego wzoru obliczamy 
stężenie 

Metody szczegółowych 

obliczeń

Po kalibracji aparatury badanie

stężenia DNA w roztworze oznacza się przez pomiar absorpcji przy 

długości fali λ = 260 nm,

określanej często jako OD

Następnie odczytuje się 

adsorpcję przy 280 i 320 nm 

lub tworzy się widmo w 

zakresie 200 – 350 nm.

Idealny roztwór do pomiarów spektrofotometrycznych

DNA to bufor o niskim stężeniu jonów, np. bufor TE. 

Długość  fali 

(nm)

substancje absorbujące

230

EDTA, polisacharydy, etanol

260

DNA, RNA

270

fenol

280

białka

320

drobiny komórkowe

Widmo adsorpcji DNA w świetle UV

 Jeżeli A

260

 równa się 1 to 

stężenie dwuniciowego

DNA (dsDNA) wynosi około 

50 µg/ml, natomiast 

jednoniciowego DNA 

(ssDNA) 33 µg/ml, RNA - 40 

µg/ml, a

oligonukleotydów 30 µg/ml. 

Preparat DNA uznaje się za czysty 

jeżeli

A

260

/A

280

 wynosi 1,8-2,0. Kiedy próbka 

DNA jest zanieczyszczona RNA to 

wartość A

260

/A

280

 jest

bliższa 2,0 , natomiast w razie gdyby 

próbka zanieczyszczona była białkami 

to wartość A

260

/A

280

 jest niższa od

1,8.

Obecnie większość laboratoriów 

dysponuje systemami typu 

NanoDrop (Thermo Scientific), 

które mierzą parametry w kropli 

<1,5μl i automatycznie przeliczają 

absorbancję na stężenie i czystość 

białkową oraz organiczną. 

Wyznaczają także wykres 

absorbancji, bardzo pomocny przy 

ustalaniu źródła 

zanieczyszczeń kwasów 

nukleinowych.