OZNACZANIE BIALKA metoda biuretowa BIOL (1)


OZNACZANIE BIAŁKA

Metoda biuretowa

Zasada:

Reakcja biuretowa jest charakterystyczna dla wiązań peptydowych występujących
w cząsteczkach białek i peptydów (zbudowanych co najmniej z trzech reszt
α - aminokwasów).

W środowisku zasadowym następuje tautomeryzacja (przegrupowanie atomów) wiązań peptydowych -CO-NH- z wytworzeniem formy enolowej:

0x08 graphic
0x01 graphic

Z ugrupowaniami tego typu jony miedzi Cu2+ tworzą dwa wiązania kowalencyjne
z atomami tlenu grup enolowych i cztery wiązania koordynacyjne z atomami azotu. Powstaje połączenie kompleksowe o zabarwieniu fiołkowoniebieskim.

Intensywność zabarwienia zależy od liczby wiązań peptydowych zawartych
w cząsteczce badanej substancji. Peptydy dają raczej zabarwienie czerwone, natomiast białka - intensywnie fioletowe. Powyższa zależność wykorzystywana jest do ilościowego oznaczania zawartości białka w roztworach metodą kolorymetryczną.

Odczynniki:

Wykonanie:

Przygotować sześć czystych, suchych probówek i oznaczyć je kolejno od 0-5. W probówkach sporządzić po 1 cm3 roztworu wzorcowego albuminy wg tabelki . Następnie do wszystkich probówek wprowadzić po 4 cm3 odczynnika biuretowego, wytrząsnąć i pozostawić na 30 minut. Po tym czasie odczytać absorbancję przy 540 nm wobec próbki kontrolnej.

Nr probówki

0

1

2

3

4

5

wzorzec albuminy w cm3

woda w cm3

stężenie albuminy w mg/cm3

0

2,5

5

7,5

10

?

absorbancja

Wykreślić krzywą wzorcową metoda najmniejszych kwadratów i odczytać z niej stężenie albuminy w badanej próbce.



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Ilościowe oznaczanie stężenia białka metodą Lowry
Oznaczanie wilgotności metodą suszarkową
Woltamperometryczne oznaczanie jonów?2 metodą wielokrotnego dodatku wzorca
22 Oznaczanie wilgotnościcałkowitej metodą wagową
Oznaczanie fenoli metoda z 4 am Nieznany
nasiona oznaczanie zywotnosci metoda ki
oznaczanie tlenu metoda Winklera
OZNACZANIE STĘŻENIA?NOLU METODĄ MIARECZKOWANIA KONDUKTOMETRYCZNEGO
Oznaczanie chlorków metodą miareczkową Mohra
13 met Mohra, Oznaczanie chlorków metodą Mohra
7 - Oznaczanie spoistosci metoda rozmakania, Inżynieria środowiska, inż, Semestr IV, Mechanika grun
Oznaczanie składu metodami chromatografii gazowej 1
cwiczenie 3 oznaczanie bialka
Wybrane Metody Oznaczania Białka W Materiale Biologicznym, MEDYCYNA, Biochemia
nasiona oznaczanie żywotności metodą krojenia
0 Oznaczenie bialek metoda Bradforda, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, materiały
Ilościowe oznaczanie miedzi metodą jodometryczną
Tabletki Kjeldahla i (do oznaczania białka w mięsie)

więcej podobnych podstron