Ćw. 3  Izolowanie komórek z narządów limfatycznych.
Izolowanie limfocytów ze śledziony.
·ð alkohol skażony
·ð jaÅ‚owe waciki
·ð pÅ‚yn fizjologiczny
·ð 10% MEM
·ð probówki na materiaÅ‚ biologiczny
·ð szalki Petrie go
·ð jaÅ‚owe narzÄ™dzia (nożyczki, pÄ™sety, strzykawki,
igły preparacyjne)
·ð stół preparacyjny na myszy
Izolacja makrofagów z otrzewnej
Wacikiem z alkoholem przetrzed skórę myszy.
Przeciąd i odciągnąd skórę, uwidaczniając otrzewną.
Pod kÄ…tem ok. 45° wprowadzid strzykawkÄ™ z 10% MEM
do otrzewnej.
Wypuścid 10% MEM do wnętrza otrzewnej.
 Wymasowad wypełniony 10% MEM brzuch
(uwolnienie większej ilości komórek).
Ostrożnie pobrad zawartośd otrzewnej strzykawką
(wysięk).
Zawartośd strzykawki przelad do probówki (wysięk).*
Izolacja limfocytów z grasicy i śledziony
GRASICA
Wacikiem z alkoholem przetrzed skórę myszy.
Przeciąd skórę, następnie otrzewną i mostek,
uwidaczniajÄ…c grasicÄ™)
Wyciąd grasicę jałowymi narzędziami (nożyczki i
pęsetka).
Umieścid grasicę na szalce Petrie go
z 10% MEM.
(dalej postępować jak ze śledzioną)
ÅšLEDZIONA
Ułożyd mysz na prawym boku.
Odkazid skórę etanolem.
Naciąd skórę jałowymi nożyczkami.
Odciągnąd skórę palcami.
Odciągnąd skórę palcami.
Przeciąd otrzewnę i uwidocznid śledzionę.
Wyciąd śledzionę jałowymi narzędziami (nożyczki i
pęsetka).
Umieścid śledzionę na szalce Petrie go
z 10% MEM.
  Wyczesad śledzionę/grasicę jałową igłą preparacyjną
lub nożyczkami.
Zebrad płyn (z limfocytami) do probówki.
Następnie odstawid zawiesinę na 15 min. w celu
oddzielenia się większych fragmentów tkanki.
Następnie zebrad klarowny płyn do probówek.*
Izolacja komórek immunologicznie kompetentnych ze szpiku kostnego
Kośd udowa myszy w płynie fizjologicznym.
Obie nasady kości uciąd.
Używając strzykawki z 10% MEM przepłukad dokładnie
wnętrze kości.
Uwolnione w ten sposób komórki następnie zebrad
pipetą do probówki.*
-ð * Wyizolowane komórki (z otrzewnej, z grasicy, ze Å›ledziony lub ze szpiku kostnego) umieÅ›cid w probówkach.
-ð Wirowad  1500 rpm przez 5 min.
-ð Zlad supernatant.
-ð Osad komórek zawiesid w 0,5-1ml 10% MEM.
-ð OkreÅ›lid żywotnoÅ›d i gÄ™stoÅ›d preparatów.
-ð Tak przygotowane komórki można wykorzystad do zaplanowanych doÅ›wiadczeo.