BIAA
KA
2.1 Wykrywanie wiązania peptydowego  reakcja biuretowa ( PIOTROWSKIEGO)
Wykonanie: Do 1 mililitra 15-krtonie rozcieńczonego roztworem soli fizjologicznej białka jaja
kurzego dodano 1 ml 10% NaOH i 20 mikrolitrów 2% siarczanu VI miedzi.
Wynik: Białko kurze pojawiło się fioletowe zabarwienie, obecne wiązania peptydowe.
Aminokwas  brak zmian w barwie, wiązania nie obecne.
Zasada: W środowisku zasadowym zachodzi tautomeryzacja wiązania peptydowego ( przy czym
analizowany związek musi mieć co najmniej 2 takie wiązania) z utworzeniem enolanowej formy. Z
takimi ugrupowaniami miedz
tworzy kompleks o fioletowej barwie.
2.2 Wysalanie i odsalanie białek
Mętność świadczy o wysoleniu się białka.
Wynik: 1 probówka jaka kurzego + 0,5 ml nasysocy r-ór siarczanu amonu - lekko mętna
2 próbówka z jaka kurzego + 1,5ml nasysocy r-ór siarczanu amonu - mętny
3 p. jaka kurzego + 1,5ml roztwór siarczanu amonu i 0,67g siarczanu amonu - bardzo
wysoko mętny
Zasada: wysalaniem białek określa się wypadanie białek z roztworu w obecności wysokich stężeń
soli. Cząsteczki wody w takim przypadku otaczające białka zostają im odebrane na rzecz soli,
dlatego też dochodzi do wytracenia się białka. Jest to proces odwracalny, dodanie rozpuszczalnika
prowadzi do ponownego rozpuszczenia białka.
2.3.1 Denaturacja cieplna w pkt. Izoelektrycznym
Zasada: zwiększone pod wpływem temperatury drgania atomów powodują rozrywanie wiązań
wodorowych. Zwiększenie stężenia jonów wodorowych powoduje zbliżenie do pH
odpowiadającemu punktowi izoelektrycznemu
Wynik: jajko białka kurzego denaturował się
2.3.2 Działanie alkoholu etylowego lub acetonu:
Wyniki: We wszystkich probówkach wytrącił się osad
Zasada: Krótkotrwałe działanie etanolu powoduje wytrącenie się białka, nie denaturując go.
Denaturacja zachodzi pprzy wyższych stężeniach i dłuższym czasie działania alkoholu.
2.3.3. Działanie kationów i anionów:
Wynik : Przy CuSO4 wyszedł niebieski i mętny r-ór
Przy Pb  osad mleczny
Różne zabarwienia występują, ponieważ wyróżnia się różne kationy metali ciężkich. Metale ciężkie
dają sole nierozpuszczalne, z kolei jony metali alkalicznych rozpuszczalne. W wysokim pH białka
mogą reagować z kationami
Zasada: Białka są subst. Amfoterycznymi. Kationy metali alkalicznych tworząsole dobrze
dysocjujące i rozpuszczalne w wodzie natomiast kationy metali ciężkich dają sole
trudnorozpuszczalne.
Aminokwasy
1.1.1 Reakcja ninhydynowa
Wyniki: Białko kurze- ścieło się ( denaturacja) i stał się fioletowy
Woda- Barak zmian w barwie, brak aminokwasu w roztworze (bezbarwny )
Prolina- niebieska ?
Zasada: Aminokwasy ogrzewane z roztworem nihydryny ulegają dekarboksylacji i oksydatywnej
deaminacji z utworzeniem amoniaku, dwutlenku węgla i aldehydu uboższego o jeden atom węgla
od macierzystego aminokwasu a nimhydryna zostaje zredukowana do hydrindantyny.
1.2.1 Wykrywanie aminokwasów aromatycznych  reakcja ksantoproteinowa
Zasada: Aminokwasy aromatyczne ogrzane ze stężonym HNO3 ulegają reakcji nitrowania.
Wyniki: Glicyna i woda  brak zmian, pierścień aromatyczny nieobecny
Tryptofan  pomarańczowa barwa, pierścień aromatyczny obecny
1.2.2. Wykrywanie grup tiolowych
a) Reakcja z nitroprusydkiem sodu
Zasada: Aminokwasy zawierające grupy tiolowe tworzą z nitroprusydkiem sodu połączenia
kompleksowe barwy czerwonofiołkowej.
Wynik: ?
b) Z jonami Pb2+
Wynik: BIAA
KO KURZE  Czarny osad, obecny aminokwas z grupą tiolową.
Cysteina  szary osad, obecna grupa tiolowa
Zasada: W zasadowym środowisku dochodzi do odszczepienia siarki z gr. tiolowej w postaci jonu
siarczkowego, który reagują z jonami ołowiu wytwarzając czarny osad.
S2- + Pb(CH3COO)2 => PbS + 2 CH3COO-