Modele tkankowe in vitro

1

Substytuty skóry

modele wykorzystywane zastosowanie

w badaniach in vitro kliniczne

2 Substytuty skóry stosowane w badaniach in vitro powinny naśladować właściwości skóry w możliwie największym stopniu.

3 Trójwymiarowe substytuty:

- naskórka

- skóry właściwej

- pełnej grubości skóry

- analiza oddziaływań międzykomórkowych w warstwach budujących skórę

- badanie interakcji między naskórkiem a skórą właściwą

- analiza funkcji barierowej warstwy rogowej naskórka

4 Substytuty skóry stosowane są w badaniach in vitro m.in. do oceny:

- przenikalności substancji w głąb skóry

- działania fototoksycznego substancji na skórę

- działania żrącego substancji na skórę

- działania drażniącego substancji na skórę

5 Substytuty naskórka

Przygotowanie modelu naskórka Episkin

1. pokrycie dna naczynia hodowlanego mieszaniną kolagenów I i III – imitacja skóry właściwej

2. wytworzenie filmu z kolagenu IV – imitacja błony podstawnej

3. wysiewanie keratynocytów zawieszonych w medium hodowlanym wyizolowanych od osób dorosłych. Hodowla aż do uzyskania ciągłej, pojedynczej warstwy komórek. (ok. 3 dni)

4. wymiana pożywki na zawierającą wyższe stężenie jonów Ca²⁺

5. umieszczenie hodowli na granicy faz pożywka – powietrze

6. po ok. 7 – 10 dniach powstaje wysoko zorganizowana struktura przypominająca architekturą żywy naskórek ludzki

6 Struktura substytutów naskórka wykazuje duże podobieństwo do ludzkiego naskórka:

- obecność warstwy podstawnej, kolczystej, ziarnistej, rogowej

- obecność markerów różnicowania keratynocytów np. keratyna, inwolukryna, filagryna

- skład lipidów zbliżony do występującego w ludzkim naskórku

7 Ograniczony czas hodowli substytutów naskórka:

- warstwa rogowa staje się grubsza niż w naturalnym naskórku, ze względu na brak możliwości złuszczania się korneocytów (powstają z keratynocytów w procesie keratynizacji)

- grubość warstwy rogowej 12 – 28 µm

Naskórek fizjologiczny:

- grubość warstwy rogowej ok. 10 µm

8 MelanoDerm

- składa się z wyizolowanych z ludzkiej skóry prawidłowych melanocytów i keratynocytów hodowanych in vitro, aż do utworzenia wielowarstwowej struktury

- melanocyty i keratynocyty izolowane są z napletków noworodków, sporadycznie od osób dorosłych

9 MelanoDerm dostępny jest w wersjach z melanocytami wyizolowanymi od osób rasy kaukaskiej, negroidalnej lub azjatyckiej.

W strukturze MelanoDerm obecne są warstwy: podstawna, kolczysta, ziarnista, rogowa (ok. 8 – 12 warstw kom)

Melanocyty zlokalizowane…

10 Substytuty SkinEthic RHPE zawierają melanocyty odpowiadające skórze o fenotypie VI

- badamy substancje rozjaśniające skórę – substytut od rasy negroidalnej

- badamy stymulację procesu pigmentacji – substytut od rasy celtyckiej

11 Substytuty pełnej grubości skóry

- ekwiwalent zachowuje strukturę przez ok. 28 dni

Zbudowany z:

- fibroblastów

- keratynocytów

- kolagenu