02.04.2014 Ciosek Nina

Ferenc Karolina

Kielar Joanna

IMMUNOLOGIA MEDYCZNA

SPRAWOZDANIE NR 1

1. Cel ćwiczenia:

a) Izolacja PBMC z krwi żylnej metodą wirowania w gradiencie gęstości Ficoll/Uropolina,

b) Liczenie komórek z wykorzystaniem kamery Fuchsa – Rosenthala,

c) założenie hodowli komórek PBMC

1. Przebieg ćwiczenia:

Prosimy o przebieg cwiczenia bo nie zdazylysmy, a ty jestes z tego dobra. Napisz na koncu ze przygotowana zawiesina 1mln kom/1ml zostala wylana na płytkę itd.

1. Wyniki:

Zliczono komórki PBMC pod mikroskopem świetlnym w 4 kolejnych kwadratowych polach kamery Fuscha - Rosenthalta. Było ich 154

Na podstawie wzoru (po prawej stronie)

oszacowano całkowitą ilość wyizolowanych komórek PBMC w 1 ml.

A = (80 000 x 154 x 10 x 1):4 = 30 800 000 kom/ml

W celu założenia hodowli wyizolowanych komórek należało rozcieńczyć otrzymaną zawiesinę komórek aby uzyskać 5mln komórek w 5 ml pożywki:

30 800 000 komórek 1000 µl

5 000 000 komorek X

X = 162,33 µl

Do objętości ~ 160 µl otrzymanej zawiesiny Komorek PBMC dodano 4,84 ml pożywki RPMI 1640.

1. Wnioski:

Uzyskane wyniki świadczą o tym , iż izolacja komórek PBMC z zastosowaniem wirowania w gradiencie gęstości jest bardzo efektywna. Z ilości uzyskanych Komorek (30 800 000) wynika iż izolacja została przeprowadzona poprawnie.

Nina jak masz jakies inne wnioski to pisz zmieniaj śmiało