Etapy techniki parafinowej – ćwiczenie 2

Zatapianie w parafinie

1. Aby materiał dobrze zatopić w parafinie należy ją odpowiednio przygotować.

Parafina powinna być:

-wytrawiona

-przegrzana

-pozbawiona zanieczyszczeń mechanicznych

-odpowietrzona

2. Termostat, w którym umieszczona jest parafina powinien być nastawiony na temp. 2⁰ –3⁰C powyżej punktu topnienia parafiny. Punkt topnienia parafiny miękkiej wynosi 48⁰ – 50⁰C, parafiny twardej 56⁰- 60⁰C. Temperaturę w termostacie nastawiamy na 60⁰C.

3. Wycinki narządowe zatapiamy w bloczki w wanienkach porcelanowych, metalowych lub metalowych ramkach:

-wanienki porcelanowe i metalowe powinny być dokładnie wymyte, odtłuszczone alkoholem absolutnym i wysmarowane bardzo cienką warstwą gliceryny(zapobiega przywieraniu parafiny)

-zaopatrzone w mini metryczkę zawierającą nr wycinka zgodny z księgą główną, (czasami nazwę utrwalacza i rodzaj narządu oraz datę zatopienia – w materiałach badanych naukowo)

-ogrzewamy je przed nalaniem parafiny w termostacie

4. Do ogrzanych wanienek wlewamy bardzo szybko płynną parafinę twardą z małej odległości (aby uniknąć zapowietrzenia) do menisku wypukłego

5. Wszelkie operacje w termostacie należy wykonywać bardzo szybko aby uniknąć wyziębienia( lekko uchylać drzwiczki)cieplarki i powstania kożuszka skrzepniętej parafiny na powierzchni bloczka.

6. Wycinki pensetą przenosimy do wanienki z parafiną bardzo szybko nie dopuszczając do powstania kożuszka skrzepniętej parafiny

7. Wycinki w wanienkach powinny być równomiernie rozmieszczone, tak aby można było łatwo wymodelować bloczki.

Dobrze Dobrze Źle

8. Po 2 godzinach wanienki z wycinkami wyjmujemy z termostatu i po zastygnięciu parafiny na powierzchni(po wytworzeniu się kożuszka) zatapiamy je w naczyniu z zimną wodą. Gliceryna rozpuszcza się w wodzie i bloczek wypływa na powierzchnię.

9. Prawidłowo zatopiony bloczek powinien być:

- jednakowej grubości

- mieć gładką powierzchnię

- równomierne zabarwienie

- nie może zawierać białych wykwitów(pęcherzyki powietrza)

10. Z otrzymanych bloczków po stwardnieniu parafiny wycina się małe bloczki zawierające po jednym zatopionym wycinku.

Krojenie skrawków na mikrotomach – Technika krojenia

1. Przed przystąpieniem do krojenia skrawków parafinowych na mikrotomie należy odpowiednio przygotować bloczek parafinowy

- wielkość i kształt bloczka zależy od kształtu i wielkości zatopionego materiału: bloczek może mieć kształt w widoku z góry kwadratu, prostokąta lub trapezu(przy tkankach słabo widocznych)

- widok z góry

- dookoła tkanki należy zachować zapas parafiny, lecz nie nadmiar(ok. 3 mm). Większy zapas powoduje marszczenie się skrawków, brak zapasu uniemożliwia powstanie taśmy

źle dobrze

-widok z boku(piramida ścięta)

dobrze źle

- przy naklejaniu bloczka na klocek należy pamiętać, żeby przy podstawie był większy zapas parafiny niż przy powierzchni, co zapewnia że bloczek nie odklei się od klocka(szczególnie przy twardych materiałach)

- orientacja bloczka zależy od kierunku krojenia(przekrój poprzeczny, podłużny)

przekrój podłużny przekrój poprzeczny

- ostateczne wymodelowanie bloczka odbywa się w czasie naklejania bloczka na klocek i jego obtapiania płynna parafiną za pomocą ogrzanego skalpela lub szpatułki.

Tak przygotowany bloczek należy schłodzić zimną wodą.

2. Przygotowany bloczek umieszczamy w uchwycie mikrotomu.

3. Mocujemy nóż pod odpowiednim kątem do powierzchni bloczka i do powierzchni skrawania.

4. Boki bloczka muszą być równoległe do boków klocka na którym jest naklejony oraz do powierzchni tnącej noża.

5. Po wytrymowaniu bloczka nastawiamy właściwą grubość skrawania i płynnymi jednostajnymi ruchami kroimy bloczek

6. Taśmy parafinowe powstałe podczas krojenia przenosimy na ciemne tło za pomocą pędzelka i igły preparacyjnej(nie dotykać palcami – parafina przykleja się do ciepłej skóry)

7. Taśmy układamy równolegle w drewnianej kasetce i zamykamy lub uzyskane skrawki przenosimy na lustro podgrzanej wody

8. Po zakończeniu krojenia mikrotom czyścimy pędzelkiem a nóż mikrotomowy przecieramy ksylenem.

Przygotowanie szkiełek podstawowych

Szkiełka nowe:

- opłukać w wodzie bieżącej

- opłukać w wodzie destylowanej

- przechowywać w 70 – 80% alkoholu

Szkiełka używane zamykane balsamem kanadyjskim:

- ksylen do całkowitego rozpuszczenia balsamu

- opłukać alkoholem absolutnym

- gorąca woda z detergentem

-woda bieżąca

- chromianka - 24h

- płukać w wodzie bieżącej – 24h

- dalej jak wyżej

Szkiełka używane zamykane żelem glicerolowym:

- gorąca woda do rozpuszczenia glicerożelu

- gorąca woda z detergentem

- dalej jak wyżej

Uwaga

Dobrze umyte szkiełka na całej powierzchni dobrze rozprowadzają wodę