11.11.2012
Ogrodnictwo, sem.III, gr.3
SPRAWOZDANIE nr 3
Czynniki warunkujące aktywność enzymów na przykładzie fosfatazy kwaśnej
Cel: Celem ćwiczenia było wykazanie, że stężenie enzymu, temperatura, pH oraz inhibitory mają wpływ na szybkość zachodzącej reakcji enzymatycznej.
Substratem wykorzystywanym do doświadczeń jest p – nitrofenylofosforan, który poddany hydrolizie daje p – nitrofenol przyjmujący w środowisku zasadowym żółtozielone zabarwienie. Ilość tego produktu jest miarą aktywności fosfatazy.
Wpływ stężenia enzymu na szybkość przebiegu reakcji
W warunkach optymalnych wraz ze wzrostem stężenia enzymu rośnie szybkośćreakcji.
Wpływ pH na szybkość reakcji enzymatycznych
Enzymy mają optymalną wartość pH, w której szybkość reakcji jest maksymalna. Niewielkie odchylenia od optimum powodują zmniejszenie szybkości reakcji, a duże odchylenia mogą powodować denaturację białek enzymu i utratę aktywności.
pH=4
pH=5,5
pH=6,5
pH=8
Inhibicja aktywności enzymów
Zastosowany w ćwiczeniu inhibitor – molibdenian amonu jest to inhibitor kompetencyjny fosfatazy kwaśnej. Przyłącza się on do wolnego enzymu i blokuje jego centrum aktywne, przez co zmniejsza liczbę cząsteczek enzymu wiążących substrat.
Do tej próby dodano inhibitor (molibdenian amonu).
Obliczam procent zahamowania reakcji przez zastosowany inhibitor:
Wpływ temperatury na aktywność enzymów
Szybkość reakcji enzymatycznych rośnie wraz ze wzrostem temperatury, wzrasta wtedy energia kinetyczna reagujących cząsteczek i zwiększa się częstotliwość ich zderzeń.
4°C
25°C
35°C
Szybkość reakcji prowadzonej w temperaturze 35° w porównaniu z wynikami uzyskanymi w temperaturze 25° wzrosła: $\frac{0,1041\ }{0,0559}$ = 1,86 razy.
Badanie termostabilności fosfatazy kwaśnej
Procentowa zmiana aktywności enzymu przetrzymywanego w temp. 45 °C w stosunku do aktywności enzymu przetrzymywanego w temp. 30 °C:
Procentowa zmiana aktywności enzymu przetrzymywanego w temp. 60 °C w stosunku do aktywności enzymu przetrzymywanego w temp. 30 °C:
W temperaturze 60°C wydajność enzymu wynosi zaledwie 34,99% w stosunku do wydajności enzymu przetrzymywanego w 30°, a wydajność enzymu w temp. 45°C wynosi 96,14%. Wynika z tego, iż wraz ze wzrostem temperatury aktywność enzymu spada.