Sprawozdanie dr Benedykt Władyka

Ilona Frączek

Magdalena Firek

Katarzyna Dyl

Wyznaczanie stałej Michaelisa dla arylosulfatazy A

Ćwiczenie zostało wykonane według zasady 3.2.2.

Stężenie badanej próbki [mg/10ml]	Numer próbki	Absorbancja	Czas [min]	Stężenie produktu [mole/dm^3]
20 (8,51µmol/dm^3)	1	0,065	2	0,015
	2	0,070	4	0,017
	3	0,095	6	0,023
	4	0,125	8	0,031
	5	0,130	10	0,032
40 (17,02µmol/dm^3)	1	0,150	2	0,036
	2	0,210	4	0,051
	3	0,300	6	0,072
	4	0,280	8	0,067
	5	0,275	10	0,066
60 (25,53µmol/dm^3)	1	0,120	2	0,029
	2	0,150	4	0,036
	3	0,160	6	0,038
	4	0,220	8	0,053
	5	0,280	10	0,067
80 (34,04µmol/dm^3)	1	0,090	2	0,022
	2	0,130	4	0,032
	3	0,210	6	0,051
	4	0,280	8	0,067
	5	0,300	10	0,072
120 (51,06mol/dm^3)	1	0,095	2	0,023
	2	0,190	4	0,046
	3	0,285	6	0,069
	4	0,420	8	0,1
	5	0,455	10	0,11

W każdej próbce znajdował się 1ml NaOH i 0,3 ml mieszaniny reakcyjne co daje 1,3 ml.

1µmol nitrokatecholu ----3,2

x--- 0,065

x=0.02 µmol nitrokatecholu

0.02 µmol nitrokatecholu ----- 1,3 ml

x----1000 ml

x=15µmoli/1000ml= 0,015moli/1000ml

Kolejne obliczenia wykonywane były według podanego schematu i zestawione zostały w tabeli.

Następnie wykreśliłyśmy wykres zależności stężenia produktu od czasu inkubacji.

Wyznaczyłyśmy styczne do podanych wykresów za pomocą równania y=ax+b

styczna60	a	0,0145
	b	0
styczna80	a	0,011
	b	0
styczna40	a	0,018
	b	0
styczn120	a	0,0115
	b	0
styczn 20	a	0,00425
	b	0

Z podanego równania wynika, że współczynnik a dla każdego równania stycznej jest równy tgα, który jest równy początkowej prędkości reakcji.

Stężenie molowe substratu obliczamy według proporcji:

2mg---0.002g

0,002g----xmoli

235g----1mol

x=0,00000851mola

0,00000851mola----1ml

x----1000ml

x=0,00851mola/dm³=8,51µmola/dm³

Kolejne obliczenia wykonywane były według podanego schematu i zestawione zostały w tabeli.

Z wykresu odczytujemy 1/K_m­ i 1/V_max

1/K_m­= -0,37 => K_m= 2,70[mol/dm³]

1/Vmax ­­=56,5 => V_max=0,018 [µmol/s^-1]

tgα=-0,37/56,5

tgα=0,00065

Wykres Lineweavera-Burka

Wnioski:

Przy niewielkim stężeniu substratu w stosunku do stężenia enzymu, pojawia się zależność liniowa, między stężeniem substratu a szybkością reakcji.

W przypadku dużego stężenia substratu, szybkość reakcji zbliża się do jej maksymalnej wartości i stężenie substratu nie ma wpływu na szybkość reakcji.

Stała Km nie zależy od stężenia enzymu.