1. Do jakiej klasy enzymatycznej należą amylazy? Jakie reakcje katalizują?

Amylazy należą do hydrolaz, katalizują reakcje hydrolizy.

1. Narysować schemat łańcucha amylopektyny i wskazać na nim miejsca działania poszczególnych amylaz.

1. Na czym polega różnica w sposobie działania na skrobię pomiędzy α-, β-amylazą i glukoamylazą? Które enzymy określa się jako endoamylazy, a które jako egzoamylazy?

α-amylaza- rozrywa wyłącznie wiązania α-1,4-glikozydowe wewnątrz substratu

β-amylaza- hydrolizuje co drugie wiązanie α-1,4-glikozydowe odrywając jednostki β-maltozy

glukoamylaza- hydroliza wiązań α-1,4-glikozydowych,odrywając kolejno jednostki glukozy

endoamylazy- α-amylaza

egzoamylazy- glukoamylaza, β-amylaza

1. Na czym polegają metody oznaczania aktywności amylaz?

Metody oznaczania aktywności enzymów amylolitycznych.

Oznaczanie aktywności enzymów amylolitycznych można przeprowadzić na podstawie pomiaru:

1)przyrostu redukcyjności w mieszaninie reakcyjnej,

2)zmian zabarwienia skrobi z jodem,

3)szybkości rozkładu substratów syntetycznych

4)zmian natężenia barwy mierzonej przy długości fali 595 nm, po reakcji ze zmodyfikowaną skrobią

Ze względu na niską specyficzność substratową enzymów amylolitycznych w stosunku do skrobi, w nieoczyszczonych homogenatach (np. wyciągu słodowym) występuje współdziałanie różnych amylaz i efekt końcowy tj. powstawanie dekstryn, oligosacharydów oraz glukozy jest wypadkową działania poszczególnych enzymów

Metoda z heksascyjanożelazianem (III) potasu- właściwości redukujące cukrów powstałych w trakcie enzymatycznej hydrolizy polisacharydów. Te uwolnione mono-, di- i oligosacharydy reagują z alkalicznym roztworem heksascyjanożelazianu (III) potasu- K3Fe(CN)6

Metoda Bernfelda- wykorzystuje się właściwości redukujące maltozy i innych cukrów, które w środowisku zasadowym redukują grupę nitrową soli sodowej kwasu DNS w pozycji 3 do grupy aminowej.

Metoda Somogyi i Nelsona-wykorzystuje się właściwości redukujące sacharydów (głównie mono- i disacharydów), które w środowisku zasadowym redukują jony miedzi (II) do jonów miedzi (I) w obecności winianu sodowopotasowego (odczynnik Somogyi) z wytworzeniem tlenku miedzi CuO w postaci ceglastego osadu. Po dodaniu kwasu arsenomolibdenowego (odczynnik Nelsona) do utworzonego tlenku miedzi zachodzi redukcja tego kwasu do odpowiedniego barwnika o kolorze błękitnym

Metoda Sandstedta, Kneena i Blisha polega na pomiarze ilości rozłożonej skrobi, na podstawie zmiany intensywności zabarwienia w mieszaninie reakcyjnej z jodem po określonym czasie działania enzymu w optymalnym pH i temperaturze.

1. Wymienić typy organizmów, w których występują α-, β- i glukoamylazy. Jakie funkcje pełnią w nich te enzymy?

-rośliny

- drobnoustroje

- zwierzęta

- człowiek

Rozkładają skrobię, glikogen oraz pokrewne im oligo- i polisacharydy.

1. Uzasadnić celowość wykonywania prób materiałowych w metodzie wykorzystującej przyrost redukcyjności w mieszaninie reakcyjnej. Czy odczyty absorbancji będą w nich większe czy mniejsze niż w próbach pełnych (z działającymi enzymami amylolitycznymi), uzasadnij odpowiedź.

Próby materiałowe pozwalają identyfikować, jak bardzo aktywne są enzymy w określonych warunkach.

Odczyty absorbancji większe będą w próbie materiałowej. W próbach pełnych wytwarzają się cukry redukujące, które obniżają wartość absorbancji. (?)

1. Podaj nazwę i napisz wzór produktu reakcji cukrów redukujących z DNS (kwasem 3,5-dinitrosalicylowym). W jakiej metodzie wykorzystywany jest DNS? Aktywności których amylaz (egzo-, czy endoamylaz) częściej oznaczane są z wykorzystaniem DNS, odpowiedź uzasadnij.

DNS wykorzystywany jest w metodzie Bernfelda. Częściej oznaczane są egzoamylazy. Egzoamylazy odrywają reszty cukrów, których właściwości redukujące wykorzystywane są przy tej metodzie.

1. Wyjaśnić, na czym polega zasada metody SKB oznaczania aktywności enzymów amylolitycznych

Metoda Sandstedta, Kneena i Blisha (SKB) oznaczania aktywności amylaz polega na pomiarze ilości rozłożonej skrobi, na podstawie zmiany intensywności zabarwienia w mieszaninie reakcyjnej z jodem po określonym czasie działania enzymu w optymalnym pH i temperaturze.

1. Wyjaśnić, na czym polega zasada metody z wykorzystaniem alkalicznego roztworu heksascyjanożelazianu (III) potasu do oznaczania aktywności enzymów amylolitycznych

Metoda z heksascyjanożelazianem (III) potasu- właściwości redukujące cukrów powstałych w trakcie enzymatycznej hydrolizy polisacharydów. Te uwolnione mono-, di- i oligosacharydy reagują z alkalicznym roztworem heksascyjanożelazianu (III) potasu- K3Fe(CN)6