Podział podłoży
Ze względu na konsystencję
Płynne (bulion mięsny, bulion mózgowo-sercowy)
Półpłynne (0,5-1% agaru)
Stałe (1,5-3% agaru)
Ze względu na zawartość substancji
Syntetyczne (skład chemiczny całkowicie zdefiniowany)
Półsyntetyczne (skład chemiczny częściowo zdefiniowany)
Naturalne (skład chemiczny zdefiniowany w przybliżeniu)
Ze względu na ilość i jakość składników odżywczych:
Proste (podstawowe) - przeznaczone dla drobnoustrojów o niskich wymaganiach odżywczych, np. Bulion zwykły (płynne), Woda peptonowa (płynne), Agar zwykły (stałe), Żelatyna (stałe).
Złożone (wzbogacone):
Rosną na nich bakterie wymagające,
Składają się z pożywki prostej i składnika wzbogacającego, np. krew zwierzęca, żółtka kurzego.
Przykłady: agar z krwią (stałe), podłoże Müller-Hinton (stałe; do antybiogramów- hydrolizat kazeiny).
Agar z krwią:
Pozwala na różnicowanie gatunków i rodzajów - typ hemolizy:
α - częściowa
β - całkowita
γ - brak hemolizy
Müeller-Hinton - podłoże do oceny lekowrażliwości
Ze względu na funkcje:
Podłoża wybiórczo - namnażające
Przeznaczone dla określonych drobnoustrojów.
Zawierają podłoża proste lub wzbogacone, do których dodano substancje przyspieszających wzrost określonych mikroorganizmów i hamujące lub uniemożliwiające wzrost innych.
Przykład: bulion z żółcią, podłoże SS
Podłoże Saburaud'a -wybiórcze dla grzybów (obniżone pH, zawiera antybiotyki: cykloheksamid i chloramfenikol)
Podłoże PYA z cetrymidem przeznaczone dla pałeczek Pseudomonas aeruginosa.
bulion z żółcią do hodowli Salmonella spp. (sole żółciowe hamują wzrost bakterii Gram - dodatnich);
podłoże SS - dla Salmonella spp. i Shigella spp.; jest używane dla izolacji ww. bakterii pochodzących z miejsc zanieczyszczonych innymi drobnoustrojami (kontaminacja). Zawiera laktozę, sole żółciowe, cytrynian żelaza, naturalną czerwień. Sole żółciowe hamują wzrost bakterii Gram-dodatnich. Pozostałe składniki odpowiadają za różnicowanie wśród bakterii Gram-ujemnych.
Podłoże Lowensteina - Jensena dla Mycobacterium tuberculosis. Zawiera zieleń malachitową , która hamuje wzrost innych drobnoustrojów
Podłoże Sołtysa - dla Salmonella spp. Podłoże wybiórcze izoluje pałeczki z grupy Salmonella.
Kolonie Salmonella typhi barwią się na tym podłożu na kolor żółtawy.
Wzrost pałeczek Escherichia coli jest częściowo zahamowany, a kolonie wybarwiają się na kolor ciemno - zielony.
Wzrost pałeczek Proteus jest zahamowany. Jeżeli wyrosną pojedyncze kolonie są zabarwione intensywnie żółto.
Podłoża różnicujące, np. podłoża szeregu biochemicznego:
Podłoże Kliglera
rozkład glukozy w warunkach tlenowych - zmiana zabarwienia części słupkowej na żółtą oznacza, że bakterie rozkładają glukozę
rozkład laktozy w warunkach tlenowych - zmiana zabarwienia części słupkowej i skośnej na żółtą oznacza, że bakterie rozkładają laktozę
wydzielanie H2S - obecność proteaz - zaczernienie podłoża świadczy o aktywności enzymów proteolitycznych
Podłoże Clarka
Odczyn VP (Voges-Proskauera)
obecność acetoiny - fermentacja z wytworzeniem 2,3-butanodiolu,
do hodowli dodać: 0,6 ml 5% alkoholowego roztworu alfa-naftolu i 0,2 ml 40% KOH oraz kilka kropli 1% kreatyny, wstrząsnąć,
w przypadku obecności acetoiny -po kilka minutach podłoże zmienia barwę na czerwoną.
Odczyn MR - określenie typu fermentacji: kwaśna lub obojętna
zmiana zabarwienia podłoża po dodaniu roztworu czerwieni metylowej
czerwone - świadczy o tym, że bakterie przeprowadzają fermentację kwaśną wytwarzając z cukrów kwasy np. mrówkowy, octowy, mlekowy, bursztynowy oraz alkohol etylowy. Wskutek tego odczyn hodowli spada poniżej pH 5. W tych warunkach znajdujący się w podłożu indykator - czerwień metylowa zmienia barwę podłoża na czerwoną
żółte - drobnoustroje fermentujące cukry z wytworzeniem produktów obojętnych nie powodują zmiany zabarwienia podłoża.
Podłoże Singera
Rozkład mocznika - obecność ureazy
zmiana zabarwienia podłoża. Na skutek alkalizacji podłoża przez amoniak, wydzielany podczas rozkładu mocznika, wskaźnik (czerwień fenolowa) zmienia barwę podłoża na czerwoną.
Wytwarzanie indolu z tryptofanu - obecność tryptofanazy.
po nakropleniu ok. 0,5 ml odczynnika Kovácsa na granicy faz powstaje czerwony pierścień.
Podłoże z mannitolem
Rozkład mannitolu zmiana zabarwienia podłoża
Podłoże z fenyloalaniną
rozkład fenyloalaniny na skutek tlenowej deaminacji fenyloalaniny. Powstaje kwas fenylopirogronowy, co powoduje zmianę zabarwienia powierzchni skosu na kolor zielono-szmaragdowy po naniesieniu powierzchni skosu 0,3 ml FeCl3.
Podłoże z 10% laktozą
rozkład laktozy w warunkach beztlenowych powoduje zmianę zabarwienia podłoża z fioletowego na żółte.
Podłoże z malonianem sodowym
Rozkład malonianu - bakterie rozkładające malonian alkalizują podłoże - zmiana zabarwienia podłoża z zielonego na niebieski. O alkalizacji podłoża świadczy kolor niebieski (odczyn +), o zakwaszeniu - żółty.
Podłoża wybiórczo - różnicujące
Są przeznaczone dla wybranych bakterii, które są różnicowane na drodze właściwości biochemicznych
Podłoże DCA:
czynnik różnicujący: eskulina
czynnik wybiórczy: azydek sodu
przeznaczone dla paciorkowców kałowych
Podłoże Chapmana dla gronkowców:
czynnik wybiórczy: 7,5% NaCl (hamuje wzrost większości drobnoustrojów
czynnik różnicujący: mannitol
Staphylococcus aureus fermentuje mannitol zakwaszając środowisko - duże kolonie otoczone żółtą strefą;
Staphylococcus epidermidis - mannitolo (-) - małe kolonie bez żółtego zabarwienia)
Podłoże MacConkey'a (MCA) - dla pałeczek Gram - ujemnych z rodziny Enterobacteriaceae
czynniki wybiórcze: dezoksycholan sodu i fiolet krystaliczny - hamują wzrost bakterii Gram (+)
czynnik różnicujący - laktoza
bakterie rozkładające laktozę (E. coli) tworzą różowo zabarwione kolonie
bakterie nierozkładające laktozy (Proteus vulgaris) - kolonie przezroczyste
Pałeczki rozkładające dezoksycholan sodu dają wokół kolonii strefę wytrąconego kwasu dezoksycholowego.
Podłoża specjalne - hodowla drobnoustrojów „wybrednych”, o specjalnych wymaganiach wzrostowych
Agar czekoladowy - zawiera zhemolizowaną krew (otrzymuje się przez zagotowanie agaru z krwią, proces ten uwalnia czynniki wzrostowe z krwinek) rosną na nim Haemophillus spp., Neisseria spp.
Podłoże Löfflera: zawiera ściętą surowicę końską dla Corynebacterium diphteriae
Bulion z tioglikolanem sodu - do hodowli beztlenowców
Podłoża transportowe - umożliwiają przeżycie bakterii w czasie transportu.
Podłoża transportowo - namnażające. Ich skład chemiczny umożliwia namnażanie się bakterii w czasie transportu.
3