Grupa II: Wrocław, dn. 2 grudnia 2011
Anna Taurogińska 176186
Alina Zawiślak 176208
Sylwia Wałęsa 175937
Biochemia I - Laboratorium
Ćwiczenie I
Amfoteryczny charakter białek i aminokwasów
1. Cel ćwiczenia
Celem doświadczenia było sporządzenie krzywych miareczkowania dwóch aminokwasów oraz wyznaczenie dla nich punktów izoelektrycznych, przedziałów buforowania oraz pK dla ich grup funkcyjnych. Kolejnym założeniem ćwiczenia było wyznaczenie punktu izoelektrycznego dla białka mleka - kazeiny.
2. Przebieg doświadczenia.
Punkt izoelektryczny kazeiny.
Pehametr wykalibrowano przy użyciu wzorcowych buforów (pH 4,01, 7,01 i 9,18). Za każdym razem płukano elektrodę i pozostawiano ją zanurzoną w roztworze. Następnie przygotowano 18 dużych i małych probówek chemicznych i sporządzono serię rozcieńczeń 1 M kwasu octowego wg schematu zamieszczonego w Tabeli 1.
Tabela 1. Seria rozcieńczeń kwasu octowego.
Nrpróbki |
Objętość H2Odest.[ml] |
Objętość CH3COOH [ml] |
1 |
13,6 |
+ 6,4 ml |
2 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 1' po wymieszaniu |
3 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 2' po wymieszaniu |
4 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 3' po wymieszaniu |
5 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 4' po wymieszaniu |
6 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 5' po wymieszaniu |
7 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 6' po wymieszaniu |
8 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 7' po wymieszaniu |
9 |
5,0 |
+ 5 ml próbki 8' po wymieszaniu |
W pierwszej i ostatniej probówce wyrównano objętości mieszanin reakcyjnych do 5 ml. Do 9 małych probówek odmierzono po 3 ml przygotowanych rozcieńczeń kwasu octowego. Następnie mierzono pH roztworów poprzez zanurzenie elektrody pehametru bezpośrednio w probówce. Wartości pH zebrano w postaci Tabeli 2.
Tabela 2. Odczytane wartości pH dla roztworów 1-9.
|
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
|
|
pH |
2,62 |
2,80 |
2,96 |
3,10 |
3,25 |
3,41 |
3,52 |
3,61 |
3,86 |
|
Zaraz po zmieszaniu |
Zmętnienie |
- |
+ |
++ |
++ |
+++ |
+++ |
+ |
- |
- |
|
Po 30 min. |
Zmętnienie |
- |
+ |
++ |
++ |
+++ |
+++ |
+ |
- |
- |
|
|
Osad |
- |
+ |
- |
++ |
+++ |
- |
- |
- |
- |
|
Przyjęte oznaczenia: - brak
+ słabe/mało
++ silne/dużo
+++ bardzo silne/bardzo dużo
Roztwory przelano z małych do dużych probówek. Do każdej z nich dodano po 1 ml 0,2% roztworu kazeiny i włączono stoper. Mieszano roztwory nie dopuszczając do spienienia, po czym zanotowano obserwacje dotyczące wyglądu mieszanin. Następnie próby odstawiono na 30 minut w celu inkubacji w temperaturze pokojowej i przystąpiono do wykonywania części „Krzywe miareczkowania aminokwasów”. Ponownie zbadano wygląd roztworów zawierających kazeinę (po 30 minutach) i zanotowano obserwacje.
Krzywe miareczkowania aminokwasów.
Pierwszym etapem tej części doświadczenia było wykonanie kontrolnego miareczkowania wody. W tym celu do czystej zlewki (pojemność 50 ml) odmierzono 40 ml wody destylowanej. W zlewce umieszczono mieszadełko magnetyczne i uruchomiono mieszanie na mieszadle magnetycznym. Opłukaną wodą destylowaną elektrodę pehametru umieszczono w badanej zlewce z wodą. Do miareczkowania wykorzystano porcję 1 M titranta HCl, dodając objętości 2, 5, 10, 50 lub 100 μl do roztworu. Dodawanie kwasu solnego zakończono przy wartości pH około 1,5.
Następnie przystąpiono do miareczkowania roztworów aminokwasów. Do zlewki odmierzono 40 ml roztworu aminokwasu. W zlewce umieszczono mieszadełko magnetyczne i uruchomiono mieszanie. W badanym roztworze aminokwasu umieszczono elektrodę pehametru uprzednio przemytą wodą destylowaną. Następnie dodawano przy użyciu pipety automatycznej 1 M kwas solny, aż do osiągnięcia pH poniżej 2,0. Postępowanie powtórzono dla drugiego aminokwasu.
Przeprowadzono analogiczne miareczkowania wody i aminokwasów z wykorzystaniem jako titranta 1 M NaOH. Miareczkowano roztwory do osiągnięcia pH około 13,0.
Wyniki miareczkowań wody i aminokwasów kwasem i zasadą zebrano w Tabelach 3., 4. i 5.
Tabela 3. Miareczkowanie kontrolne wody za pomocą kwasu solnego i zasady sodowej.
Miareczkowanie kwasem |
Miareczkowanie zasadą |
||||||
Lp. |
Vtitranta [ml] |
pH |
ntitranta [mol] |
Lp. |
Vtitranta [ml] |
pH |
ntitranta [mol] |
1 |
0,00 |
4,40 |
0,00000 |
1 |
0,00 |
5,10 |
0,00000 |
2 |
0,01 |
3,67 |
0,00001 |
2 |
0,01 |
10,14 |
0,00001 |
3 |
0,02 |
3,39 |
0,00002 |
3 |
0,02 |
10,52 |
0,00002 |
4 |
0,03 |
3,23 |
0,00003 |
4 |
0,03 |
10,73 |
0,00003 |
5 |
0,04 |
3,10 |
0,00004 |
5 |
0,04 |
10,89 |
0,00004 |
6 |
0,05 |
3,00 |
0,00005 |
6 |
0,05 |
11,00 |
0,00005 |
7 |
0,06 |
2,92 |
0,00006 |
7 |
0,06 |
11,10 |
0,00006 |
8 |
0,07 |
2,87 |
0,00007 |
8 |
0,07 |
11,16 |
0,00007 |
9 |
0,08 |
2,81 |
0,00008 |
9 |
0,08 |
11,22 |
0,00008 |
10 |
0,10 |
2,71 |
0,00010 |
10 |
0,10 |
11,33 |
0,00010 |
11 |
0,12 |
2,64 |
0,00012 |
11 |
0,12 |
11,40 |
0,00012 |
12 |
0,14 |
2,58 |
0,00014 |
12 |
0,14 |
11,47 |
0,00014 |
13 |
0,16 |
2,53 |
0,00016 |
13 |
0,16 |
11,53 |
0,00016 |
14 |
0,18 |
2,48 |
0,00018 |
14 |
0,21 |
11,64 |
0,00021 |
15 |
0,20 |
2,43 |
0,00020 |
15 |
0,26 |
11,73 |
0,00026 |
16 |
0,24 |
2,36 |
0,00024 |
16 |
0,31 |
11,80 |
0,00031 |
17 |
0,28 |
2,30 |
0,00028 |
17 |
0,36 |
11,86 |
0,00036 |
18 |
0,32 |
2,24 |
0,00032 |
18 |
0,46 |
11,93 |
0,00046 |
19 |
0,38 |
2,16 |
0,00038 |
19 |
0,56 |
11,98 |
0,00056 |
20 |
0,44 |
2,10 |
0,00044 |
20 |
0,66 |
12,03 |
0,00066 |
21 |
0,50 |
2,02 |
0,00050 |
21 |
0,86 |
12,15 |
0,00086 |
22 |
0,60 |
1,96 |
0,00060 |
22 |
1,06 |
12,24 |
0,00106 |
23 |
0,70 |
1,87 |
0,00070 |
23 |
1,26 |
12,30 |
0,00126 |
24 |
0,80 |
1,81 |
0,00080 |
24 |
1,46 |
12,36 |
0,00146 |
25 |
0,90 |
1,76 |
0,00090 |
25 |
1,66 |
12,41 |
0,00166 |
26 |
1,05 |
1,69 |
0,00105 |
26 |
2,16 |
12,49 |
0,00216 |
27 |
1,20 |
1,64 |
0,00120 |
27 |
2,66 |
12,55 |
0,00266 |
28 |
1,35 |
1,59 |
0,00135 |
28 |
3,16 |
12,59 |
0,00316 |
29 |
1,50 |
1,51 |
0,00150 |
29 |
3,66 |
12,63 |
0,00366 |
|
|
30 |
4,66 |
12,69 |
0,00466 |
||
|
|
31 |
5,66 |
12,73 |
0,00566 |
||
|
|
32 |
6,66 |
12,76 |
0,00666 |
||
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
||
Tabela 4. Miareczkowanie aminokwasów kwasem solnym (odczytane wartości pH, dodane objętości [ml] oraz obliczenia).
Lp. |
pH |
Vtitranta [ml] |
VH20titranta [ml] |
Vaatitranta [ml] |
ntitranta/naa |
Lp. |
pH |
Vtitranta [ml] |
VH20titranta [ml] |
Vaatitranta [ml] |
ntitranta/naa |
Alanina |
Kwas asparaginowy |
||||||||||
1 |
6,73 |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
0,0000 |
1 |
2,86 |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
0,000 |
2 |
5,30 |
0,01 |
0,00 |
0,01 |
0,0025 |
2 |
2,83 |
0,01 |
0,01 |
0,00 |
0,000 |
3 |
4,81 |
0,02 |
0,00 |
0,02 |
0,0050 |
3 |
2,81 |
0,02 |
0,02 |
0,00 |
0,000 |
4 |
4,50 |
0,03 |
0,00 |
0,03 |
0,0075 |
4 |
2,78 |
0,03 |
0,03 |
0,00 |
0,000 |
5 |
4,36 |
0,04 |
0,00 |
0,04 |
0,0100 |
5 |
2,76 |
0,04 |
0,04 |
0,00 |
0,000 |
6 |
4,24 |
0,05 |
0,00 |
0,05 |
0,0125 |
6 |
2,75 |
0,05 |
0,05 |
0,00 |
0,000 |
7 |
4,15 |
0,06 |
0,00 |
0,06 |
0,0150 |
7 |
2,72 |
0,07 |
0,07 |
0,00 |
0,000 |
8 |
4,07 |
0,07 |
0,00 |
0,07 |
0,0175 |
8 |
2,69 |
0,09 |
0,09 |
0,00 |
0,000 |
9 |
4,00 |
0,08 |
0,00 |
0,08 |
0,0200 |
9 |
2,66 |
0,11 |
0,11 |
0,00 |
0,000 |
10 |
3,95 |
0,09 |
0,00 |
0,09 |
0,0225 |
10 |
2,61 |
0,16 |
0,13 |
0,03 |
0,015 |
11 |
3,90 |
0,10 |
0,00 |
0,10 |
0,0250 |
11 |
2,55 |
0,21 |
0,15 |
0,06 |
0,030 |
12 |
3,84 |
0,11 |
0,00 |
0,11 |
0,0275 |
12 |
2,50 |
0,26 |
0,17 |
0,09 |
0,045 |
13 |
3,81 |
0,12 |
0,00 |
0,12 |
0,0300 |
13 |
2,45 |
0,31 |
0,19 |
0,12 |
0,060 |
14 |
3,75 |
0,14 |
0,00 |
0,14 |
0,0350 |
14 |
2,40 |
0,36 |
0,22 |
0,14 |
0,070 |
15 |
3,69 |
0,16 |
0,01 |
0,15 |
0,0375 |
15 |
2,36 |
0,41 |
0,24 |
0,17 |
0,085 |
16 |
3,63 |
0,18 |
0,01 |
0,17 |
0,0425 |
16 |
2,30 |
0,51 |
0,28 |
0,23 |
0,115 |
17 |
3,58 |
0,20 |
0,01 |
0,19 |
0,0475 |
17 |
2,24 |
0,61 |
0,32 |
0,29 |
0,145 |
18 |
3,48 |
0,25 |
0,01 |
0,24 |
0,0600 |
18 |
2,19 |
0,71 |
0,36 |
0,35 |
0,175 |
19 |
3,41 |
0,30 |
0,02 |
0,28 |
0,0700 |
19 |
2,14 |
0,81 |
0,4 |
0,41 |
0,205 |
20 |
3,34 |
0,35 |
0,02 |
0,33 |
0,0825 |
20 |
2,09 |
0,91 |
0,44 |
0,47 |
0,235 |
21 |
3,27 |
0,40 |
0,02 |
0,38 |
0,0950 |
21 |
2,05 |
1,01 |
0,48 |
0,53 |
0,265 |
22 |
3,19 |
0,50 |
0,03 |
0,47 |
0,1175 |
22 |
2,01 |
1,11 |
0,50 |
0,61 |
0,305 |
23 |
3,11 |
0,60 |
0,04 |
0,56 |
0,1400 |
23 |
1,97 |
1,21 |
0,60 |
0,61 |
0,305 |
24 |
3,04 |
0,70 |
0,04 |
0,66 |
0,1650 |
||||||
25 |
2,98 |
0,80 |
0,05 |
0,75 |
0,1875 |
||||||
26 |
2,92 |
0,90 |
0,06 |
0,84 |
0,2100 |
||||||
27 |
2,87 |
1,00 |
0,07 |
0,93 |
0,2325 |
||||||
28 |
2,82 |
1,10 |
0,08 |
1,02 |
0,2550 |
||||||
29 |
2,77 |
1,20 |
0,09 |
1,11 |
0,2775 |
||||||
30 |
2,73 |
1,30 |
0,10 |
1,20 |
0,3000 |
||||||
31 |
2,64 |
1,50 |
0,12 |
1,38 |
0,3450 |
||||||
32 |
2,55 |
1,70 |
0,15 |
1,55 |
0,3875 |
||||||
33 |
2,46 |
1,90 |
0,19 |
1,71 |
0,4275 |
||||||
34 |
2,37 |
2,10 |
0,24 |
1,86 |
0,4650 |
||||||
35 |
2,29 |
2,30 |
0,28 |
2,02 |
0,5050 |
||||||
36 |
2,22 |
2,50 |
0,34 |
2,16 |
0,5400 |
||||||
37 |
2,15 |
2,70 |
0,38 |
2,32 |
0,5800 |
||||||
38 |
2,08 |
2,90 |
0,46 |
2,44 |
0,6100 |
||||||
39 |
2,01 |
3,10 |
0,50 |
2,60 |
0,6500 |
||||||
40 |
1,94 |
3,30 |
0,60 |
2,70 |
0,6750 |
||||||
Tabela 5. Miareczkowanie aminokwasów zasadą sodową (odczytane wartości pH, dodane objętości [ml] oraz obliczenia).
Lp. |
pH |
Vtitranta [ml] |
VH20titranta [ml] |
Vaatitranta [ml] |
ntitranta/naa |
Lp. |
pH |
Vtitranta [ml] |
VH20titranta [ml] |
Vaatitranta [ml] |
ntitranta/naa |
Alanina |
Kwas asparaginowy |
||||||||||
1 |
5,96 |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
0,0000 |
1 |
2,76 |
0,00 |
0,00 |
0,00 |
0,0000 |
2 |
7,01 |
0,01 |
0,00 |
0,01 |
0,0025 |
2 |
2,80 |
0,01 |
0,00 |
0,01 |
0,0025 |
3 |
7,38 |
0,02 |
0,00 |
0,02 |
0,0050 |
3 |
2,82 |
0,02 |
0,00 |
0,02 |
0,0050 |
4 |
7,59 |
0,03 |
0,00 |
0,03 |
0,0075 |
4 |
2,85 |
0,03 |
0,00 |
0,03 |
0,0075 |
5 |
7,74 |
0,04 |
0,00 |
0,04 |
0,0100 |
5 |
2,88 |
0,04 |
0,00 |
0,04 |
0,0100 |
6 |
7,83 |
0,05 |
0,00 |
0,05 |
0,0125 |
6 |
2,92 |
0,05 |
0,00 |
0,05 |
0,0125 |
7 |
7,94 |
0,06 |
0,00 |
0,06 |
0,0150 |
7 |
3,00 |
0,10 |
0,00 |
0,10 |
0,0250 |
8 |
8,01 |
0,07 |
0,00 |
0,07 |
0,0175 |
8 |
3,10 |
0,15 |
0,00 |
0,15 |
0,0375 |
9 |
8,08 |
0,08 |
0,00 |
0,08 |
0,0200 |
9 |
3,18 |
0,20 |
0,00 |
0,20 |
0,0500 |
10 |
8,17 |
0,10 |
0,00 |
0,10 |
0,0250 |
10 |
3,27 |
0,25 |
0,00 |
0,25 |
0,0625 |
11 |
8,27 |
0,12 |
0,00 |
0,12 |
0,0300 |
11 |
3,35 |
0,30 |
0,00 |
0,30 |
0,0750 |
12 |
8,35 |
0,14 |
0,00 |
0,14 |
0,0350 |
12 |
3,44 |
0,35 |
0,00 |
0,35 |
0,0875 |
13 |
8,42 |
0,16 |
0,00 |
0,16 |
0,0400 |
13 |
3,52 |
0,40 |
0,00 |
0,40 |
0,1000 |
14 |
8,49 |
0,18 |
0,00 |
0,18 |
0,0450 |
14 |
3,60 |
0,45 |
0,00 |
0,45 |
0,1125 |
15 |
8,54 |
0,20 |
0,00 |
0,20 |
0,0500 |
15 |
3,68 |
0,50 |
0,00 |
0,50 |
0,1250 |
16 |
8,61 |
0,25 |
0,00 |
0,25 |
0,0625 |
16 |
3,76 |
0,55 |
0,00 |
0,55 |
0,1375 |
17 |
8,68 |
0,30 |
0,00 |
0,30 |
0,0750 |
17 |
3,84 |
0,60 |
0,00 |
0,60 |
0,1500 |
18 |
8,74 |
0,35 |
0,00 |
0,35 |
0,0875 |
18 |
3,93 |
0,65 |
0,00 |
0,65 |
0,1625 |
19 |
8,78 |
0,40 |
0,00 |
0,40 |
0,1000 |
19 |
4,02 |
0,70 |
0,00 |
0,70 |
0,1750 |
20 |
8,89 |
0,50 |
0,00 |
0,50 |
0,1250 |
20 |
4,11 |
0,75 |
0,00 |
0,75 |
0,1875 |
21 |
9,00 |
0,60 |
0,00 |
0,60 |
0,1500 |
21 |
4,24 |
0,80 |
0,00 |
0,80 |
0,2000 |
22 |
9,09 |
0,70 |
0,00 |
0,70 |
0,1750 |
22 |
4,34 |
0,85 |
0,00 |
0,85 |
0,2125 |
23 |
9,17 |
0,80 |
0,00 |
0,80 |
0,2000 |
23 |
4,48 |
0,90 |
0,00 |
0,90 |
0,2250 |
24 |
9,29 |
1,00 |
0,00 |
1,00 |
0,2500 |
24 |
4,68 |
0,95 |
0,00 |
0,95 |
0,2375 |
25 |
9,41 |
1,20 |
0,00 |
1,20 |
0,3000 |
25 |
4,78 |
0,97 |
0,00 |
0,97 |
0,2425 |
26 |
9,51 |
1,40 |
0,00 |
1,40 |
0,3500 |
26 |
4,91 |
0,99 |
0,00 |
0,99 |
0,2475 |
27 |
9,61 |
1,60 |
0,00 |
1,60 |
0,4000 |
27 |
5,08 |
1,01 |
0,00 |
1,01 |
0,2525 |
28 |
9,70 |
1,80 |
0,00 |
1,80 |
0,4500 |
28 |
5,33 |
1,03 |
0,00 |
1,03 |
0,2575 |
29 |
9,87 |
2,00 |
0,00 |
2,00 |
0,5000 |
29 |
5,54 |
1,04 |
0,00 |
1,04 |
0,2600 |
30 |
9,95 |
2,20 |
0,00 |
2,20 |
0,5500 |
30 |
5,86 |
1,05 |
0,00 |
1,05 |
0,2625 |
31 |
10,03 |
2,40 |
0,00 |
2,40 |
0,6000 |
31 |
6,45 |
1,06 |
0,00 |
1,06 |
0,2650 |
32 |
10,12 |
2,60 |
0,01 |
2,59 |
0,6475 |
32 |
7,13 |
1,07 |
0,00 |
1,07 |
0,2675 |
33 |
10,21 |
2,80 |
0,01 |
2,79 |
0,6975 |
33 |
7,50 |
1,08 |
0,00 |
1,08 |
0,2700 |
34 |
10,32 |
3,00 |
0,01 |
2,99 |
0,7475 |
34 |
7,66 |
1,09 |
0,00 |
1,09 |
0,2725 |
35 |
10,44 |
3,20 |
0,01 |
3,19 |
0,7975 |
35 |
7,76 |
1,10 |
0,00 |
1,10 |
0,2750 |
36 |
10,58 |
3,40 |
0,02 |
3,38 |
0,8450 |
36 |
7,88 |
1,11 |
0,00 |
1,11 |
0,2775 |
37 |
10,75 |
3,60 |
0,03 |
3,57 |
0,8925 |
37 |
8,66 |
1,12 |
0,00 |
1,12 |
0,2800 |
38 |
10,99 |
3,80 |
0,05 |
3,75 |
0,9375 |
38 |
8,73 |
1,13 |
0,00 |
1,13 |
0,2825 |
39 |
11,31 |
4,00 |
0,10 |
3,90 |
0,9750 |
39 |
8,81 |
1,14 |
0,00 |
1,14 |
0,2850 |
40 |
11,58 |
4,20 |
0,19 |
4,01 |
1,0025 |
40 |
8,86 |
1,15 |
0,00 |
1,15 |
0,2875 |
41 |
11,67 |
4,30 |
0,23 |
4,07 |
1,0175 |
41 |
8,99 |
1,17 |
0,00 |
1,17 |
0,2925 |
42 |
11,78 |
4,40 |
0,30 |
4,10 |
1,0250 |
42 |
9,07 |
1,19 |
0,00 |
1,19 |
0,2975 |
43 |
11,88 |
4,60 |
0,38 |
4,22 |
1,0550 |
43 |
9,14 |
1,21 |
0,00 |
1,21 |
0,3025 |
44 |
11,97 |
4,80 |
0,56 |
4,24 |
1,0600 |
44 |
9,28 |
1,26 |
0,00 |
1,26 |
0,3150 |
45 |
12,03 |
5,00 |
0,66 |
4,34 |
1,0850 |
45 |
9,39 |
1,31 |
0,00 |
1,31 |
0,3275 |
46 |
12,08 |
5,20 |
0,76 |
4,44 |
1,1100 |
46 |
9,50 |
1,36 |
0,00 |
1,36 |
0,3400 |
47 |
12,13 |
5,40 |
0,84 |
4,56 |
1,1400 |
47 |
9,59 |
1,41 |
0,00 |
1,41 |
0,3525 |
48 |
12,16 |
5,60 |
0,86 |
4,74 |
1,1850 |
48 |
9,67 |
1,46 |
0,00 |
1,46 |
0,3650 |
49 |
12,19 |
5,80 |
0,95 |
4,85 |
1,2125 |
49 |
9,75 |
1,51 |
0,00 |
1,51 |
0,3775 |
50 |
12,24 |
6,30 |
1,06 |
5,24 |
1,3100 |
50 |
9,82 |
1,56 |
0,00 |
1,56 |
0,3900 |
51 |
12,29 |
6,80 |
1,26 |
5,54 |
1,3850 |
51 |
9,89 |
1,61 |
0,00 |
1,61 |
0,4025 |
52 |
12,33 |
7,30 |
1,36 |
5,94 |
1,4850 |
52 |
9,96 |
1,66 |
0,00 |
1,66 |
0,4150 |
53 |
12,36 |
7,80 |
1,46 |
6,34 |
1,5850 |
53 |
10,05 |
1,76 |
0,00 |
1,76 |
0,4400 |
54 |
12,39 |
8,30 |
1,54 |
6,76 |
1,6900 |
54 |
10,16 |
1,86 |
0,01 |
1,85 |
0,4625 |
55 |
12,41 |
8,80 |
1,66 |
7,14 |
1,7850 |
55 |
10,26 |
1,96 |
0,01 |
1,95 |
0,4875 |
56 |
12,45 |
9,30 |
1,90 |
7,40 |
1,8500 |
56 |
10,46 |
2,06 |
0,01 |
2,05 |
0,5125 |
57 |
12,48 |
10,30 |
2,15 |
8,15 |
2,0375 |
57 |
11,02 |
2,26 |
0,05 |
2,21 |
0,5525 |
|
58 |
11,60 |
2,46 |
0,19 |
2,27 |
0,5675 |
|||||
|
59 |
11,87 |
2,66 |
0,36 |
2,30 |
0,5750 |
|||||
|
60 |
12,01 |
2,86 |
0,62 |
2,24 |
0,5600 |
|||||
|
61 |
12,12 |
3,06 |
0,82 |
2,24 |
0,5600 |
|||||
|
62 |
12,20 |
3,26 |
0,95 |
2,31 |
0,5775 |
|||||
|
63 |
12,26 |
3,46 |
1,13 |
2,33 |
0,5825 |
|||||
|
64 |
12,31 |
3,66 |
1,28 |
2,38 |
0,5950 |
|||||
|
65 |
12,35 |
3,86 |
1,44 |
2,42 |
0,6050 |
|||||
|
66 |
12,39 |
4,06 |
1,56 |
2,50 |
0,6250 |
|||||
|
67 |
12,45 |
4,56 |
1,91 |
2,65 |
0,6625 |
|||||
|
68 |
12,50 |
5,06 |
2,19 |
2,87 |
0,7175 |
|||||
|
69 |
12,57 |
6,06 |
2,91 |
3,15 |
0,7875 |
|||||
|
70 |
12,62 |
7,06 |
3,60 |
3,46 |
0,8650 |
|||||
|
71 |
12,66 |
8,06 |
4,16 |
3,90 |
0,9750 |
|||||
|
72 |
12,69 |
9,06 |
4,66 |
4,40 |
1,1000 |
|||||
|
73 |
12,71 |
10,06 |
5,16 |
4,90 |
1,2250 |
|||||
3. Obliczenia i wykresy.
W celu sporządzenia krzywych miareczkowania wody wyznaczono liczności titranta:
Obliczone wartości dla miareczkowania wody kwasem solnym i zasadą sodową zebrano w Tabeli 3.
Sporządzono Wykres 1.
Wykres 1. Krzywa miareczkowania wody kwasem (kolor niebieski) i zasadą (kolor czerwony).
Z Wykresu 1. odczytano jaka objętość kwasu (VH2Otitranta) została zużyta do zmiareczkowania wody zawartej w roztworze aminokwasu w każdym etapie miareczkowania roztworu (Tabele 4. i 5.).
Wyznaczono objętość titranta zużytą do zmiareczkowania cząsteczek aminokwasu w badanym roztworze.
Następnie obliczono jaka ilość titranta ntitr. przypada na liczność aminokwasu w roztworze naa.
Sporządzono wykres krzywych miareczkowania aminokwasów kwasem i zasadą - Wykres 2. Odczytano z niego wartości pK dla grup funkcyjnych aminokwasów i na tej podstawie obliczono ich punkt izoelektryczny pI.
Tabela 6. Wartości pK i pI dla aminokwasów.
Aminokwas |
Wartość odczytana |
Wartość literaturowa |
Przedział buforowania |
|
Alanina |
pI |
6,06 |
6,02 |
--- |
|
pK αNH3+ |
10,12 |
9,69 |
9,09-10,75 |
|
pK αCOO- |
2,00 |
2,34 |
2,00-2,91 |
Asparaginian |
pI |
2,81 |
2,98 |
--- |
|
pK αNH3+ |
9,89 |
9,87 |
9,14-10,46 |
|
pK αCOO- |
2,00 |
1,92 |
2,00-2,80 |
|
pK βCOO- |
3,84 |
3,87 |
3,35-4,78 |
Wykres 2. Krzywe miareczkowania alaniny i kwasu asparaginowego za pomocą kwasu i zasady.
4. Wnioski.
Punkt izoelektryczny jest to taka wartość pH, przy której białko ma najniższą rozpuszczalność, w związku z tym przy zbyt dużym stężeniu wytrąca się ono z roztworu. Obserwujemy wówczas zmętnienie oraz osad. W naszym doświadczenie maksymalne zmętnienie zaobserwowano przy pH=3,25. Dane literaturowe podają przedział punktu izoelektrycznego kazeiny w zakresie 4,1-5,6 w zależności od frakcji (typ α, β, κ).
Niemożliwe było dokładne wyznaczenie dolnej granicy przedziału buforowania dla grupy α-karboksylowej dla obu aminokwasów, ponieważ granica ta według danych literaturowychi znajduje się poniżej pH=2,0, natomiast miareczkowanie, zgodnie z instrukcją, prowadzone było tylko do tej wartości.
Otrzymane wyniki (Tabela 6.) są zgodne z danymi literaturowymii. Niewielkie rozbieżności wynikają z niedokładności urządzenia pomiarowego - pehametru.
Color atlas of biochemistry, Koolman, Röhm, New York, wyd. Thieme 2005
J. Dairy Sci., 67, 1599-1631, 1984
pH
zasada
kwas
ntitr [mol]
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
II O- Biochemia cwiczenie 5, Politechnika Wrocławska - ochrona środowiska, biochemia - laboratorium
II O- Biochemia cwiczenie 1, Politechnika Wrocławska - ochrona środowiska, biochemia - laboratorium
SprawkoA B, biochemia laboratorium, Biochemia - sprawozdania inne
II O- Biochemia cwiczenie 4, Politechnika Wrocławska - ochrona środowiska, biochemia - laboratorium
II O- Biochemia cwiczenie 3, Politechnika Wrocławska - ochrona środowiska, biochemia - laboratorium
G, biochemia laboratorium, Biochemia - sprawozdania inne
Przykładowe zadania obliczeniowe z biochemii, biochemia laboratorium
Sprawozdanie - aminokwasy, Technologia Żywności i Żywienie Człowieka, V semestr, Biochemia, Laborato
II O- Biochemia cwiczenie 2, Politechnika Wrocławska - ochrona środowiska, biochemia - laboratorium
ĆW I word, biochemia - laboratorium
II O- Biochemia cwiczenie 7, Politechnika Wrocławska - ochrona środowiska, biochemia - laboratorium
Biochemia sprawozdanie O, biochemia laboratorium, Biochemia - sprawozdania inne
Biochemia Sprawozdanie A, biochemia laboratorium, Biochemia - sprawozdania inne
Oksydoreduktazy sprawozdanie, biochemia laboratorium
biochemia sprawozdanie O (4), biochemia laboratorium, O (moje)
Biochemia Sprawozdanie K (topnienie DNA), biochemia laboratorium, Biochemia - sprawozdania inne
Pytania biochemia lab, biochemia laboratorium
Ćwiczenie E, biochemia laboratorium, E (moje)
ćw. H wykres, biochemia laboratorium, H (moje)
więcej podobnych podstron