SWScan00011

(fiuroiif MttHb

OZNACZANIE MttHb WE KRWI met. EVELYNA I MALLOYA Zasada oznaczenia

MetHb w środowisku kwaśnym ma charakterystyczne max absorbancji przy długości fali k-635 nm. które zanika po przeprowadzeniu MetHb cyjankiem sodowym w cyjanomcthcmoglobinę. Różnica absorbancji przed i po dodaniu cyjanku sodowego jest miarą stężenia MetHb

Wykonanie oznaczenia

Pobrać 0.2 ml krwi do 10 ml bufoni fosforanowego 1/60 M (pH 6.6), zmieszać i po 5 min odczytać absorbancję A| przy długości fali 635 nm Roztwór krwi rozdzielić do 2 probówek:

b)    do jednej z nich dodać kroplę zobojętnionego roztworu cyjanku sodowego, zmieszać i pozostawić na 2 minuty, po czym odczytać absorbancję Aj przy tej samej długości fali wobec buforu fosforanowego

c)    do drugiej probówki dodać kroplę KjFcfCNfe i odczytać absorbancję di przy długości fali 635 nm. następnie dodać I kroplę zobojętnionego roztworu cyjanku sodowego i odczytać absorbancję dj przy tej samej długości fali. Jako odnośnik stosować bufor fosforanowy.

Obliczanie wyników

MetHb [g/100 ml] - (A,-Aj) x f

gdzie: A| - absorbancja przed dodaniem cyjanku sodowego Aj - absorbancja po dodaniu cyjanku sodowego f - mnożnik obliczany każdorazowo w sposób podany niżej

stężenie Hb (g/IOOml krwi|

------

(d|-dj)

gdzie di - absorbancja całkowitej MetHb

dj - absorbancja całkowitej CNMctHb

Dla celów klinicznych stężenie MetHb można wyrazić w procentach całkowitej zawartości Hb danej próbki krwi Jeżeli równolegle próbkę tej samej krwi poddamy utlenianiu żclazicyjankictn potasu - uzyskamy przeprowadzenie całej Hb w MetHb (d|), którą następnie działaniem cyjanku można przeprowadzić w całości w CNMctHb (dj). Zawartość całkowita pierw otnej Hb jest wprost proporcjonalna do różnicy (di - dj).

(A,-A_a)

MetHb(%] --* 100%

(di - dj)

ILOŚCIOWE OZNACZANIE Hb met. CYJANMETHEM0GL0B1N0WĄ

Zasada oznaczenia

W obecności utleniacza KiFefCN)* oraz KCN hemoglobina przechodzi w cyjanmethcmoglobinę mającą charakterystyczne pasmo absorpcji w okolicach 540 nm

Wykonanie oznaczenia

Odmierzyć 5 ml odczynnika Drabkina. następnie 0,02 ml krwi. przepłukując mikropipetę odczynnikiem Po 15 min odczytać absorbancję przy długości fali 540 nm wobec odczynnika Drabkina

Obliczanie wyników Hb (g/100 ml] - A x 36.7

S