20101020040

b) Oznaczanie stężenia białka w badanej surowicy krwi Do tizech probówek dodaj po 0,5 mL rozcieńczonej 10 x surowicy krwi i po 2 mi 0.9% NaCI dokładnym wymieszaniu dodaj do wszystkich probówek po 2,5 mL odczynnika t»ureirj»ego > ponownie wymieszaj. Przygotuj próbę ślepą (2,5 mL 0,0% NaCI i 2.5 mL odczynnika b*uretowego> Po 20 minutach zmierz absorbancję prób względem próby ślepej przy A » 525 nm Odczytaj z krzywej wzorcowej zawartość białka w każdej z trzech prób, następnie oblicz średnia arytmetyczną z otrzymanych wartości stężeń W celu uzyskania stężenia blotka w badanej surowicy krwi. uwzględnij początkowe rozcieńczenie surowicy Wykonaj analogiczne obliczenia korzystając z wyliczonego współczynnika kalibracji.

krwi metoda Lowry eoo

ćwiczenie 3:

a)

Z roztworu standardowego albuminy (100 pg/mL w zasadowym 0 9% roztworze NaCI) przygot.

(używając zasadowego 0.9% roztworu NaCI jako rozpuszczalnika! roztwory o objętości *ońco*«5 v = 1 mL zawierające białko o stężeniach 20 40 90 80 10C ugmL Do każdej arobóMśn zawierającej białko o odpowiednim stężeniu dode| po 5 mL odczynnka C (zaeaecmry -:t miedzi). Zawartość probówek dokładnie wymieszaj < oddam na tO minut Następ*"* nasjdwaad

energicznie mieszając, dodaj do każdej probówki po 0 5 mL odczynnSca Foara-wscaite^ Przygotuj próbę zerową (ślepą) zawierającą 1 mL zasadowego 0.9% roztworu NaC>, 5 mL odczynnika C10,5 mL odczynnika Folina-Ciocaltau.

Po 30 minutach zmierz absorbancję prób badanych wobec próby ślepej na spektrofotometrze przy długości fali A = 750 nm

Korzystając z uzyskanych wyników przygotuj na papierze milimetrowym wykres zaieznoso absorbancji (oś Y) od stężenia białka (oś X) oraz oblicz współczynnik kalibracji K (C/A) b) Oznaczanie stężenia białka w badanej surowicy krwi Do trzech probówek dodaj po 1 mL rozcieńczonej 1000 x surowicy krwi i po 5 mL odczynnika C Po dokładnym wymieszaniu, odstaw próby na 10 min. Następnie dodaj do wszystkich probówek po 0,5 mL odczynnika Folina-Ciocalteu, natychmiast energicznie mieszając Przygotuj próbę ślepą (1 mL zasadowego 0.9% roztworu NaCI, 5 mL odczynnika C10,5 mL odczynnika Fottna-Ciocałtau)

Po 30 minutach zmierz absorbancję prób względem próby ślepe) przy A = 750 nm Odczytaj z krzywej wzorcowej zawartość białka w każdej z trzech prób, następnie oblicz średnią arytmetyczną z otrzymanych wartości stężeń. W celu uzyskania stężenia białka w badanej surowicy krwi, uwzględnij początkowe rozcieńczenie surowicy Wykonaj analogiczna obbczema korzystając z wyliczonego współczynnika kalibracji