20101020041

b) Oznaczanie stężenia białka w badanei surowicy Krwi Do trzech probówek dodaj po 0,5 mL rozcieńczonej 10 x surowicy krwi i po 2 ml 0 9% NeCi Po dokładnym wymieszaniu dodaj do wszystkich probówek po 2,5 mL odczynnika biuretowego i ponownie wymieszaj. Przygotuj próbę ślepą (2,5 mL 0,9% NaCI i 2,5 mL odczynnika bturetowegoj Po 20 minutach zmierz absorbancję prób względem próby ślepe] przy A = 525 nm Odczytaj z krzywej wzorcowej zawartość białka w każdej z trzech prób. następnie oblicz średnia arytmetyczną z otrzymanych wartości stężeń W celu uzyskania stężenia białka w badane/ surowicy krwi. uwzględnij początkowe rozcieńczenie surowicy Wykonaj analogiczne obliczenia kvzystając z wyliczonego współczynnika kalibracji

Ćwiczenie 3: Oznaczanie stężenia frafre w surowicy krwi metoda Lowr/ eoo

a)    Przygotowanie ktzywet wzorcował

Z roztworu standardowego albuminy (100 pg/ml w zasadowym j 9% roztworze NaCI) przygo*.j| (używając zasadowego 0,9% roztworu NeCI jako rozpuszczalnika) roztwory o oojętoso końcowej ,

= 1 mL zawierające białko o stężeniach 20 40 00, 80. 100 pg/mL Do kazdaj probówka zawierającej białko o odpowiednim stęzerau dodai po 5 mL odczynnika C :zasac-.\-_: twór miedzi). Zawartość probówek dokładne wymeszai i    na 10 mnut Następne    —ias:

energicznie mieszając, dodaj do kaZdat próbami po 0 5 mL odczynnka Fokna-Cocabau. Przygotuj próbę zerową (ślepą) zawierającą 1 mL zasanoewgo 0.9% roztworu NaC. 5 mL odczynnika C10.5 mL odczynnika Fofenw-Oocabsu

Po 30 minutach zmierz absorbanqę prób badanych wobec próby ślepej na spektrofotometrze przy długości fali A = 750 nm.

Korzystając z uzyskanych wyników przygotuj na papierze milimetrowym wykres zaieznosc absorbancji (oś Y) od stężenia białka (oś X) oraz oblicz współczynnik Kalibracji K (C/At

b)    Oznaczanie stężenia biajka w badangj suroąją kjwj

Do trzech probówek dodaj po 1 mL rozdsńczonej 1000 x surowicy krwi i po 5 mL odczynnika C Po dokładnym wymieszaniu, odstaw próby na 10 min. Następnie dodaj do wszystkich probówek po 0,5 mL odczynnika Folina-Ciocalteu, natychmiast energicznie mieszając Przygotuj próbę ślepą (1 mL zasadowego 0,9% roztworu NaCI, 6 mL odczynnika C10,6 mL odczynnika Folina-Ciocalteu).

Po 30 minutach zmierz absorbancję prób względem próby ślepej przy A = 750 nm Odczytaj z krzywej wzorcowej zawartość białka w każdej z trzech prób, następnie oblicz średnią arytmetyczną z otrzymanych wartośd stężeń. W celu uzyskania stężania białka w badanej surowicy krwi, uwzględnij początkowe rozcieńczenie surowicy. Wykonaj analogiczne obfcczei korzystając z wyliczonego współczynnika kalibracji.