003

2010-11-01

P

Wytrząsanie

•    Umożliwia rozbicie tkanki na mniejsze fragmenty

•    Powoduje rozdzielanie się komórek potomnych po kolejnych podziałach

•    Zapobiega tworzeniu się agregatów komórkowych

•    Stwarza jednolite warunki dla całej populacji

•    Dostępność substancji odżywczych zależy od stopnia dyspersji

•    Umożliwia napowietrzanie zawiesiny i wymianę gazów (C0₂, etylenu)

Wytrząsanie

•    Luźny kalus - 30 obr./min. w początkowej fazie

•    Zbity kalus - 180 obr./min. w początkowej fazie

•    W kolejnych pasażach intensywność obrotów można zmniejszyć

•    Zaprzestanie wytrząsania powoduje opadanie komórek na dno kolby i śmierć z braku tlenu

Filtrowanie

•    Ma na celu usunięcie resztek eksplantatu oraz zbyt dużych agregatów komórkowych

•    Wykorzystuje się specjalne sitka metalowe o różnej wielkości otworów

•    Wielkość otworów sitka ustala się doświadczalnie

•    Jeśli komórki mają tendencję do tworzenia agregatów, to filtrowanie należy przeprowadzać przed każdym pasażem

Pasażowanie zawiesiny

•    Przenoszenie zawiesiny do świeżej pożywki

•    Przenoszenie odbywa się zwykle co 7-21 dni

•    Odstępy czasowe ustala się doświadczalnie w zależności od tempa namnażania się komórek

•    Im wyższe tempo namnażania tym mniejszy odstęp pomiędzy pasażami (szybsze wyczerpywanie się substancji odżywczych w pożywce)

•    Używa się pipet szklanych lub automatycznych ze sterylną końcówką

Pasażowanie zawiesiny

•    Pasażowanie przeprowadza się w tym samym okresie cyklu życiowego zawiesin komórkowych

•    Stopień rozcieńczenia komórek w świeżej pożywce zależy od czasu trwania kultury i gęstości zawiesiny

•    Gęstość inokulum - zwykle 10M0⁵ komórek / lml pożywki

•    Źle dobrana gęstość inokulum ma negatywny wpływ na namnażanie się komórek

2