img007 (3)

114

Większość metod stosowanych do wykrywania enterokoków wykorzystuje inko czynnik selektywny azydek sodowy. Posiewu dokonuje sic podobnie jak przy oznaczaniu tninna coti z rozcieńczę fi dziesiętnych. W zależności od metody hodowlę prowadzi sie w 37 lub 45°C w ciągu 24-48 godzin. O wyniku dodatnim świadczy oprócz zmętnieniu zmiana barwy podłoża.

MIANO BEZTLENOWCÓW

Oznaczenie beztlenowców, szczególnie liczby ich komórek, jest trudne z uwagi na konieczność przestrzegania warunków ściśle beztlenowych. Jak dotąd nic ma uniwersalnej metody ilościowego oznaczaniu bakterii beztlenowych. Stad analizy mikrobiologiczne su prowadzone w kierunku oznuczcnin obecności beztlenowców, tub ich miana (ryc. 52).

Rvc. 52. ZeMow do hodowli beztlenowców: A - nnnoroMat,

B • pompn prótmowa. C • połoczeme z monomeircm

W żywności szczególnie ważna jest grupa beztlenowców przctrwalm-kujących. Do wykrycia tych drobnoustrojów należy próbę wyjściowa iub jej rozcieńczenie ogrzać w 80°C przez 10 minut, w celu zabicia form wegetatywnych. Jako podłoża stosuje sie zarówno pożywki State, jak i płynne. Bardzo często jest to podłoże Wrzoska, które przed posiewem należy zregenerować

(odtlenić) przez ogrzanie w 100% Posiewu dokonuje sic z rcaciertaseń dziesiętnych. Inkubację prowadzi sic w ciągu 72 godzin w 37%. Za wynik dodatni przyjmuje sic zmętnienie pożywki oraz obecność pęcherzyków gazu. Wynik dodatni wymaga potwierdzenia badaniem mikroskopowym lub posiewem na podłoże selektywne. W propanieic mikroskopowym powinny być widoczne G(+) laseczki.

Zadanie ćwiczeniowe 1 Oznaczanie miana coli w mleku

■    Próbkę mleka rozcieńczyć w zakresie I0’¹- I0'⁴

■    Z mleka nierozcicńczoncgo oraz z każdego rozcieficzenia wykonać posiewy, przenosząc po I cm do probówek zawierających 10 cm¹ pożywki z żółcią i zielenią brylantowa oraz rurką Durbama.

■    Po inkubacji w 37 °C przez 24-48 godzin odczytać wynik i określić miano coli.

Badania potwierdzające obecność poleczek okrąznicy

■    Przygotować płytki z podłożem Endo.

■    Z dodatnich prób dla miana coli pobrać po 0.1 ctn^J hodowli i rozprowadzić po powierzchni podłoża (za pomoce czy lub giaszczki).

■    PD hodowli w 37% przez 24-48 godzin sprawdzić wynik próby na podstawie morfologii kolonii. Kolonie £ coli na podłożu Endo mnją zabarwienie ciemnoczerwone z metalicznym połyskiem lub sa różowe z ciemniejszym środkiem.

Zadanie ćwiczeniowe 2

Oznaczanie miana enterokoków w mleku

■    Z otrzymanej próbki mleka sporządzić rozcieńczenia w zakresie I0'¹ -10^-4

■    Z każdego rozcieńczenia posiać do probówek zawierających pożywkę z azydkiem sodowym i fioletem krystalicznym.

■    Hodowle prowadzić w 37 °C przez 48 godzin, odczytać wynik i określić miano enterokoków.

Zadanie ćwiczeniowe 3

Oznaczanie miana beztlenowców przetrwamikujących

■    Z otrzymanego produktu przygotować rozcieńczenia w zakresie 10'¹- I0⁵

■    Probówki z podłożem Wrzoska zregenerować celem usunięcia tlenu, przez gotowanie 10-15 minut w 100%.

■    Probówki ostudzić do 50% i posiać po I cm¹ z każdego rozcieńczenia do rzędu przygotowanych probówek.

■    W celu zabicm form wegetaty wnycii posiewy w probówkach ogrzać przez 10 minut w 80% (możno ogrzać przygotowane rozcieńczenia próbki). Hodowlę prowadzić w 37% przez 48-72 godziny, po czym odczytać miano beztlenowców.