9 (967)

Oznaczanie aktywności enzymów Miarą aktywności enzymu jest szybkość katalizowanej reakcji (V)

Szybkość reakcji (aktywność) = zmianie stężenia reagentów (substratów i produktów) w jednostce czasu Enzymy oznacza się mierząc uzyskany efekt katalityczny:

E + S—>ES—>E + P • ilość powstającego produktu w czasie ■ ubytek ilości substratu w czasie

jednostka uniwersalna (U)

U = -1 jjmol S/1min lub + 1 jjmol P/1min (25°C) katal (kat) [układ SI - Systeme International] kat = - 1 mol S/1 s lub +1molP/1s    (25°C)

1U = 1 umol/min = 16,67 nanokat

aktywność całkowita - liczba jednostek aktywności enzymu w próbie aktywność właściwa (specyficzna) - U/mg białka aktywność molekularna (liczba obrotów. k„.) -jjmol S /1 min przez 1 pmol E (jedno centrum aktywne)

Czynniki zmieniające szybkość reakcji

• wpływ stężenia substratu

podwojenie V

małe stężenie substratu: podwojenie stężenia [S] = podwojenie V duże stężenie substratu: enzym ulega wysyceniu

[S]

•    stężenie enzymu

przy wysokim stężeniu substratu: podwojenie [E]^:

•    wpływ temperatury

wzrost temp. o 10°C powoduje podwojenie V aż do osiągnięcia optimum działania enzymu (reguła Van’t Hoffa) przy dalszym wzroście temp. następuje denaturacja cieplna białka enzymatycznego

•    wpływ pH

•    każdy enzym ma optymalne pH działania w którym szybkość katalizowanej przez niego reakcji jest maksymalna

•    w pH znacznie odbiegającym od optymalnego enzym ulega denaturacji

•    w pH zbliżonym do optymalnego o aktywności decyduje stan dysocjacji grup:

-    wpływających na konformację centrum aktywnego

-    wpiływających na wiązanie enzymu z substratem