B i o c h e m i a {y w n o [c i B I O T E C H N O L O G I A w i c z e n i e 3
w i c z e n i e 3
T e m a t : P E R O K S Y D A C J A L I P I D W .
C z [ I
O d c z y n n i k i :
1 . k w a s l i n o l o w y :
k w a s l i n o l o w y - 0 , 7 7 4 g + 0 , 5 m l T w e e n 2 0 , u z u p e Bn i w k o l b c e m i a r o w e j d o o b j t o [c i 2 5 m l b u f o r e m
f o s f o r a n o w y m 0 , 0 5 m o l / d m 3 o p H 6 , 8
2 . b u f o r f o s f o r a n o w y 0 , 0 5 m o l / d m 3 , p H 6 , 8 i 7 , 0
3 . k w a s a s k o r b i n o w y 0 , 0 2 7 6 m o l / d m 3
4 . s i a r c z a n m i e d z i ( I I ) 0 , 0 2 7 6 m o l / d m 3
5 . B H A 2 , 7 6 % w e t a n o l u
6 . E D T A 0 , 0 2 7 6 m o l / d m 3
7 . E D T A 5 %
8 . H C l 1 %
9 . e t a n o l 9 5 %
1 0 . k w a s t i o b a r b i t u r o w y ( T B A ) 0 , 3 % w 9 5 % e t a n o l u
1 1 . e t a n o l 6 2 %
W y k o n a n i e :
P r z y g o t o w a n a s t p u j c e r o z t w o r y :
r o z t w r L : r o z c i e Dc z o n y k w a s l i n o l o w y
2 , 5 m l k w a s u l i n o l o w e g o ( 1 )
+ 2 5 , 1 m l b u f o r u f o s f o r a n o w e g o 0 , 0 5 m o l / d m 3 p H 7 , 0
r o z t w r L A C : r o z c i e Dc z o n y k w a s l i n o l o w y + k w a s a s k o r b i n o w y + s i a r c z a n m i e d z i
2 , 5 m l k w a s u l i n o l o w e g o ( 1 )
+ 0 , 1 m l k w a s u a s k o r b i n o w e g o
+ 0 , 1 m l s i a r c z a n u m i e d z i
+ 2 4 , 9 m l b u f o r u f o s f o r a n o w e g o 0 , 0 5 m o l / d m 3 p H 7 , 0
r o z t w r L A C E : r o z c i e Dc z o n y k w a s l i n o l o w y + k w a s a s k o r b i n o w y + s i a r c z a n m i e d z i + E D T A
2 , 5 m l k w a s u l i n o l o w e g o ( 1 )
+ 0 , 1 m l k w a s u a s k o r b i n o w e g o
+ 0 , 1 m l s i a r c z a n u m i e d z i
+ 0 , 1 m l E D T A
+ 2 4 , 8 m l b u f o r u f o s f o r a n o w e g o 0 , 0 5 m o l / d m 3 p H 7 , 0
r o z t w r L A C B : r o z c i e Dc z o n y k w a s l i n o l o w y + k w a s a s k o r b i n o w y + s i a r c z a n m i e d z i + B H A
2 , 5 m l k w a s u l i n o l o w e g o ( 1 )
+ 0 , 1 m l k w a s u a s k o r b i n o w e g o
+ 0 , 1 m l s i a r c z a n u m i e d z i
+ 0 , 1 m l B H A
+ 2 4 , 8 b u f o r u f o s f o r a n o w e g o 0 , 0 5 m o l / d m 3 p H 7 , 0
r o z t w r L C : r o z c i e Dc z o n y k w a s l i n o l o w y + s i a r c z a n m i e d z i
2 , 5 m l k w a s u l i n o l o w e g o ( 1 )
+ 0 , 1 m l s i a r c z a n u m i e d z i
+ 2 5 m l b u f o r u f o s f o r a n o w e g o 0 , 0 5 m o l / d m 3 p H 7 , 0
W s z y s t k i e r o z t w o r y i n k u b o w a w c i e m n o [c i , w t e m p e r a t u r z e 2 5 o C p r z e z 2 0 h . P o t y m c z a s i e
p r z e n i e [ p o 1 m l k a |d e g o r o z t w o r u d o p r o b w e k . D o d a 0 , 3 m l 5 % E D T A + 0 , 2 m l 1 % H C l + 0 , 5
m l 9 5 % e t a n o l u + 2 m l 0 , 3 % T B A , w y m i e s z a . Z a m k n i t e p r o b w k i u m i e [c i w Ba zn i w o d n e j
6 0 o C i i n k u b o w a p r z e z 1 h . Z a w a r t o [ p r o b w e k d o p e Bn i d o o b j t o [c i 1 0 m l 6 2 % e t a n o l e m ,
p r z e s c z y i c z y t a a b s o r b a n c j p r z y d Bu g o [c i f a l i 5 3 2 n m w z g l d e m w o d y . P o r w n a w a r t o [c i
a b s o r b a n c j i d l a p o s z c z e g l n y c h r o z t w o r w , w y c i g n w n i o s k i .
U n i w e r s y t e t R o l n i c z y w K r a k o w i e 1 K a t e d r a B i o t e c h n o l o g i i {y w n o [c i
B i o c h e m i a {y w n o [c i B I O T E C H N O L O G I A w i c z e n i e 3
C z [ I I
O d c z y n n i k i :
1 . m i e s z a n i n a T B A - T C A : 0 , 3 7 5 % T B A i 1 5 % T C A r o z p u s z c z o n e w 0 , 2 5 N H C l .
2 . 2 % r o z t w r B H T
3 . 3 0 m o l / d m 3 r o z t w r T E P ( 1 , 1 , 3 , 3 - t e t r a e t o k s y p r o p a n )
M a t e r i a B:
s u r o w e , m i e l o n e m i s o z i n d y k a
W y k o n a n i e :
Z w a |y d o d w c h k r t k i c h p r o b w e k p o 1 g m i s a s u r o w e g o . D o j e d n e j n a w a |k i d o d a o d
r a z u 2 0 l 2 % B H T i o d s t a w i d o l o d w k i . D r u g p r o b w k w s t a w i d o w r z c e j w o d y , z a m k n
k o r k i e m i g o t o w a p r z e z 3 0 m i n u t . P o o s t u d z e n i u d o d a 2 0 l 2 % B H T . D o o b u p r b e k - m i s o
s u r o w e i g o t o w a n e - w p r o w a d z i 5 m l m i e s z a n i n y T B A - T C A . P r o b w k i w s t a w i d o w r z c e j Ba zn i
w o d n e j i g o t o w a p r z e z 2 0 m i n u t . P o o s t u d z e n i u , z a w a r t o [ p r o b w e k o d w i r o w a ( 4 t y s . o b r o t w /
m i n u t p r z e z 2 0 m i n u t ) . P r z e c z y t a a b s o r b a n c j s u p e r n a t a n t w p r z y d Bu g o [c i f a l i 5 3 2 n m ,
w z g l d e m [l e p e j p r b y o d c z y n n i k o w e j .
O b l i c z y s t |e n i e T B A R S ( s u b s t a n c j i r e a g u j c y c h z k w a s e m t i o b a r b i t u r o w y m ) w o p a r c i u o
o d c z y t a b s o r b a n c j i w z o r c a M D A ( d i a l d e h y d m a l o n o w y ) o s t |e n i u 2 , 5 m o l / d m 3 i w y r a z i w
m o l a c h M D A / g m i s a . W o b l i c z e n i a c h u w z g l d n i z a w a r t o [ w o d y w m i s i e .
P R Z Y G O T O W A N I E P R B Y ZL E P E J I W Z O R C A
a ) [l e p a p r b a o d c z y n n i k o w a : d o p r o b w k i w p r o w a d z i 1 m l w o d y d e s t y l o w a n e j i 5 m l
m i e s z a n i n y T B A i T C A
b ) w z o r z e c M D A o s t |e n i u 2 , 5 m o l / d m 3 : d o p r o b w k i w p r o w a d z i 0 , 5 m l w o d y
d e s t y l o w a n e j , 0 , 5 m l 3 0 m o l / d m 3 r o z t w o r u T E P i 5 m l m i e s z a n i n y T B A i T C A .
P r o b w k i u m i e [c i w e w r z c e j Ba zn i w o d n e j i g o t o w a p r z e z 2 0 m i n u t . O s t u d z i . B a r d z o
d o k Ba d n i e w y m i e s z a p r b k w z o r c o w p r z e d c z y t a n i e m a b s o r b a n c j i ( 5 3 2 n m w z g l d e m p r b y
[l e p e j ) .
Z a Bc z n i k i :
U n i w e r s y t e t R o l n i c z y w K r a k o w i e 2 K a t e d r a B i o t e c h n o l o g i i {y w n o [c i
B i o c h e m i a {y w n o [c i B I O T E C H N O L O G I A w i c z e n i e 3
p e r o k s y d a c j a n i e n a s y c o n y c h k w a s w t Bu s z c z o w y c h
O
O
O H L H
O H
.
1
O H
O 2
i n i c j a c j a
O H
H 2 O
O O
O
.
O H O H
O
O
O
.
.
O H
O H L
.
O 2
+ O H
O
p r o p a g a c j a
O
O
.
O H
L O O
L O O H
O 2
L H
.
.
O 2
L
L O O i t d .
.
.
L O O
L
L H
c y k l i c z n y n a d t l e n e k
O H
c y k l i c z n y e n d o n a d t l e n e k
O
O
O H
r e i n i c j a c j a
F e 3 +
M D A i i n n e p r o d u k t y
O
F e 2 + + H +
O
O O
O
d i a l d e h y d m a l o n o w y ( M D A )
C C H 2 C
O H
H
H
O
4 - h y d r o k s y - 2 , 3 - t r a n s - n o n e n a l t e r m i n a c j a
H 3 C C H 2 C H C H C H C
H
4 . .
O H
L + L L - L
O
. .
h e p t a - 2 , 4 - d i e n a l
L O O + L O O L = O + L O H + O 2
H 3 C C H 2 C H C H C H C H C
H
. .
L O O + L L = O + L O H
O
C
H 3 C C H 2 C H C H 2 H h y d r o k s y o k t a n a l
2 3
O H
L H - n i e n a s y c o n y k w a s t Bu s z c z o w y
L . - r o d n i k a l k i l o w y
H 3 C C H 3 e t a n
L O O . - r o d n i k n a d t l e n k o w y
L O . - r o d n i k a l k o k s y l o w y
L O O H - w o d o r o n a d l e n e k k w a s u t Bu s z c z o w e g o
H 3 C C H 2 C H 3 p e n t a n
3
U n i w e r s y t e t R o l n i c z y w K r a k o w i e 3 K a t e d r a B i o t e c h n o l o g i i {y w n o [c i
B i o c h e m i a {y w n o [c i B I O T E C H N O L O G I A w i c z e n i e 3
r e a k c j a d i a l d e h y d u m a l o n o w e g o z k w a s e m t i o b a r b i t u r o w y m
S N N
S H
H S O H O H H O
N
O
O
2 C C H 2 C
+
N N
H
N
H
O H H O
O H
T B A M D A c z e r w o n o - r |o w y p r o d u k t
p r z e k s z t a Bc e n i e 1 , 1 , 3 , 3 - t e t r a e t o k s y p r o p a n u d o d i a l d e h y d u m a l o n o w e g o
O
O
C C H 2 C
H
H
O C H 2 C H 3
H 3 C C H 2 O
+
H C +
C H C H 2 O C H 2 C H 3 2 H 2 O
H 3 C C H 2 O
4 H 3 C C H 2 O H
s y n t e t y c z n e a n t y o k s y d a n t y f e n o l o w e
O H
C H 3 O H C H 3
C H 3
C H 3
H 3 C C H 3
C H 3
C H 3
C H 3
C H 3
O C H 3
B H A B H T
r e a k c j a z m i a t a n i a w o l n y c h r o d n i k w p r z e z z w i z e k f e n o l o w y
O
O H O O
O
L . L H
.
.
.
r e a k c j a r e i n i c j a c j i
L O O H + C u 2 + ! C u + + H + + L O O " A s k - H 2 + F e 3 + ! A s k - H " + F e 2 + + H +
L O O " + L H ! L O O H + L " F e 2 + + O 2 ! F e ( V ) - O 2 ! F e 3 + + O 2 " -
L O O H + F e 3 + ! F e 2 + + H + + L O O "
C u 2 + ! C u + ( p o d w p By w e m r e d u k t o r a ) L O O H + F e 2 + ! F e 3 + + O H - + L O "
L O O H + C u + ! C u 2 + + O H - + L O "
L O " + L H ! L O H + L "
U n i w e r s y t e t R o l n i c z y w K r a k o w i e 4 K a t e d r a B i o t e c h n o l o g i i {y w n o [c i
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