7803159915

Oznaczenia zaw. sacharozy glukozy i fruktozy + reakcje

Do oznaczania zawartości poszczególnych cukrów w mieszaninach soków najczęściej stosuje się metody chromatograficzne i enzymatyczne. Otrzymane ilości sacharozy, glukozy i fruktozy oraz obliczone stosunki zawartości glukozy do zawartości fruktozy porównuje się ze standardami, np. zawartymi w Kodeksie Praktyki. Wskaźnikiem dodatku cukru bądź nie deklarowanego soku są odchylenia od ustalonych norm.

Zasada metody

Zawartość D-glukozy jest oznaczana przed i po enzymatycznej hydrolizie sacharozy. Zawartość D-fruktozy jest oznaczana po oznaczeniu D-glukozy.

Oznaczanie D-glukozy przed inwersją

W pH 7,6 enzym heksokinaza (HK) katalizuje fosfoiylację D-glukozy przy udziale adenozyno-5-trójfosforanu (ATP) z wytworzeniem adenozyno-5-dwufosforanu (ADP).

HK

D-glukoza + ATP -» G-6-P + ADP

W obecności dehydrogenazy glukozo-6-fosforanu (G6P-DH), powstały D-glukozo-6-fosforan (G6P-P) jest specyficznie utleniany za pomocą fosforanu dinukleotydu nikotynarmdo-adeninowego (NADP) do D-głukonianu-6-fosforanowego z wydzieleniem zredukowanego fosforanu dinukleotydu nikotynamido-adeninowego (NADPH).

G6P-DH

G-6-P + NADP⁺ -*    D-glukonian-6-fosforanowy + NADPH + H⁺

Ilość wydzielonego NADPH mierzona absorbancją roztworu przy długości fali 365 nm odpowiada zawartości D-glukozy

Oznaczanie D-fruktozy

Heksokinaza katalizuje również fosforyiację D-fruktozy do fruktozo-6-fosforanu (F-6-P) za pomocą ATP.

HK

D-fruktoza + ATP -> F-6-P + ADP

Po zakończeniu reakcji F-6-P ulega konwersji do G-6-P przy udziale izomerazy fosfoglukozowej (PGI).

PGI

F-6-P - G-6-P

G-6-P reaguje ponownie z NADP z wytworzeniem D-głukonianu-6-fosforanowego i NADPH. Ilość wydzielonego NADPH odpowiada zawartości D-fruktozy.

Zawartości sacharydów obliczyć ze wzoru:

V ■ MW

c---AAr

edvl000

w którym:

c - zawartość sacharydu [g/dm³],

V - objętość końcowa - sacharoza, D-glukoza - 3,020 cm³, D-fruktoza 3,040 cm³, v - objętość próby [cm³],

MW - masa molowa oznaczanego sacharydu - sacharoza - 342,3 g/mol,