ÿþL A B O R A T O R I U M 5 / 2 0 0 9 . . . W L A B O R A T O R I U M
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N o w e m e t o d y s t o s o w a n e
w a n a l i z i e |y w n o [c i
a s p e k t m i k r o b i o l o g i c z n y
S T R E S Z C Z E N I E G Bó w n e c i g u o s t a t n i e j d e k a d y o b s e r - l i w e j e s t b a r d z o d o k Ba d n e o k r e [l e n i e
n i e b e z p i e c z e Ds t w o d l a z d r o w i a , w o w a n o w z r o s t i n f e k c j i w y w o - p r z y n a l e |n o [c i g a t u n k o w e j b a k t e r i i ,
a n a w e t |y c i a k o n s u m e n t a z w i z a n e W Ba n y c h s p o |y c i e m p r o d u k t ó w a n a w e t o k r e [l e n i e i c h s z c z e p u .
j e s t z p o g o r s z e n i e m j a k o [c i z d r o w o t n e j |y w n o [c i o w y c h o n i e d o s t a t e c z n e j j a -
p r o d u k t u , c o w y n i k a z o b e c n o [c i k o [c i . E p i d e m i o l o g i a t y c h z a t r u w c i | P R Z Y C Z Y N Y R O Z W O J U
i r o z w o j u m i k r o o r g a n i z m ó w , p r z e d e e w o l u u j e n i e t y l k o d l a t e g o , |e p o p u l a c j a S Z Y B K I C H T E C H N I K
w s z y s t k i m c h o r o b o t w ó r c z y c h . D l a t e g o s t a Ba s i w y j t k o w o w r a |l i w a , a l e p r z e d e I D E N T Y F I K A C J I
t e | j e d n o z n a c z n a i s z y b k a i d e n t y f i k a c j a w s z y s t k i m z p o w o d u z m i a n y s t y l u |y - R o z w ó j n o w o c z e s n y c h t e c h n i k z z a k r e -
z a g r o |e D m i k r o b i o l o g i c z n y c h w s u r o w c u , c i a , t j . j e m y c o r a z r ó |n o r o d n i e j |d n i s u m i k r o b i o l o g i i , i m m u n o l o g i i , b i o l o -
n a w s z y s t k i c h e t a p a c h p r o c e s u p r z y g ó d k u l i n a r n y c h , p o [w i c a m y m n i e j g i i , b i o c h e m i i i b i o f i z y k i p r z y c z y n i B s i
t e c h n o l o g i c z n e g o i w s a m y m p r o d u k c i e c z a s u n a p r z y g o t o w a n i e p o s i Bk ó w , k o r z y - d o p o s t p u w z a k r e s i e s z y b k i c h m e t o d
j e s t k o n i e c z n a . W a r t y k u l e p r z e d s t a w i o n o s t a m y z w y g o d n e j |y w n o [c i . R o z w i n By o z n a c z a n i a i c h a r a k t e r y s t y k i m i k r o o r g a -
z e s t a w i e n i e g Bó w n y c h n u r t ó w i t e c h n i k s i r ó w n i e | n o w e z a g r o |e n i a , n o w e g r u p y n i z m ó w w |y w n o [c i . N o w o c z e s n e m e t o -
m i k r o b i o l o g i c z n y c h s t o s o w a n y c h o b e c n i e p a t o g e n ó w z w i z a n e z r o z w o j e m t e c h - d y m i k r o b i o l o g i c z n e s u k i e r u n k o w a n e
w p r a k t y c e l a b o r a t o r y j n e j i p r z e m y s Bo w e j . n o l o g i i p r o d u k c j i |y w n o [c i , p r o c e s ó w p r z e d e w s z y s t k i m n a s z y b k i e i n i e z a w o d n e
S AO W A K L U C Z O W E m e t o d y p r z e t w a r z a n i a i d y s t r y b u c j i . w y k r y w a n i e b a k t e r i i c h o r o b o t w ó r c z y c h .
d e t e k c j i m i k r o o r g a n i z m ó w W z a k r e s i e s z y b k i e g o w y k r y w a n i a i i d e n -
M E T O D Y I D E N T Y F I K A C J I t y f i k a c j i m i k r o o r g a n i z m ó w p r y m w i o d
S U M M A R Y T h e m a i n h a z a r d M I K R O O R G A N I Z M Ó W n a u k i z z a k r e s u m e d y c y n y . P o s t p u j c y
t o c o n s u m e r s h e a l t h , o r e v e n l i f e , D o i d e n t y f i k a c j i m i k r o o r g a n i z m ó w w y - r o z w ó j m e t o d i n s t r u m e n t a l n y c h i t e s t ó w
i s c o n n e c t e d w i t h t h e d e c r e a s e o f k o r z y s t u j e m y m e t o d y , k t ó r e m o |e m y d i a g n o s t y c z n y c h o r a z p o s t p n a u k o w y
p r o d u c t s h e a l t h q u a l i t y w h i c h i s t h e p o d z i e l i n a 3 g r u p y : w y k o r z y s t u j e s i d o u l e p s z e n i a m e t o d
f i r s t o f a n u m b e r o f c o n s e q u e n c e s o f m e t o d y f e n o t y p o w e w y k o r z y s t u j c e i z o l a c j i , w c z e s n e g o w y k r y w a n i a , l i c z e n i a ,
t h e p r e s e n c e a n d g r o w t h o f p a t h o g e n i c c e c h y f e n o t y p o w e m i k r o o r g a n i z m ó w , c h a r a k t e r y s t y k i i i d e n t y f i k a c j i m i k r o o r -
m i c r o o r g a n i s m s . T h e r e f o r e u n e q u i v o c a l k t ó r e m o |n a z a o b s e r w o w a p o d m i - g a n i z m ó w . M o n i t o r o w a n i e p r o d u k c j i
a n d f a s t i d e n t i f i c a t i o n o f m i c r o b i o l o g i c a l k r o s k o p e m . N a p o d s t a w i e w y g l d u |y w n o [c i p o p r z e z s y s t e m H A C C P ( H a -
r i s k s i n r a w m a t e r i a l , a t a l l s t a g e s o f z e w n t r z n e g o n i e m o |n a z i d e n t y f i - z a r d A n a l y s i s C r i t i c a l C o n t r o l P o i n t s ) o r a z
p r o d u c t i o n p r o c e s s a n d i n f i n i s h e d k o w a b a k t e r i i z e w z g l d u n a p o d o - k o n t r o l h i g i e n y w r a m a c h G H P ( G o o d
p r o d u c t i s n e c e s s a r y . I n t h e p a p e r b i e Ds t w o k o m ó r e k m i d z y r ó |n y m i H y g i e n i c P r a c t i c e ) , G M P ( G o o d M a n u f a c t u -
t h e r e v i e w o f t h e m a i n t r e n d s a n d f i l o g e n e t y c z n i e r o d z i n a m i , r i n g P r a c t i c e ) , M R A ( M i c r o b i a l R i s k A s s e s -
m i c r o b i o l o g i c a l t e c h n i q u e s b e i n g u s e d m e t o d y b i o c h e m i c z n e m e t o d y s t o s o w a - s m e n t ) , R M ( R i s k M a n a g e m e n t ) , R C ( R i s k
a t p r e s e n t i n l a b o r a t o r y a n d i n d u s t r i a l n e g Bó w n i e w p r z e m y [l e i w y k o r z y s t u j c e C o m m u n i c a t i o n ) o r a z T Q M ( T o t a l Q u a l i t y
p r a c t i c e h a s b e e n p r e s e n t e d . p r o d u k t y s z l a k ó w m e t a b o l i c z n y c h c h a - M a n a g e m e n t ) j e s t s k u t e c z n y m , z g o d n y m
K E Y W O R D S m e t h o d s o f r a k t e r y s t y c z n e d l a d a n y c h d r o b n o u s t r o - z o b e c n y m i t r e n d a m i s p o s o b e m z a r z d z a -
m i c r o o r g a n i s m s d e t e c t i o n j ó w . N a p o d s t a w i e a n a l i z y m e t a b o l i t ó w n i a j a k o [c i i b e z p i e c z e Ds t w e m |y w n o [c i .
b a k t e r y j n y c h j e s t e [m y w s t a n i e z a k l a s y f i - S y s t e m y t e w y m a g a j j e d n a k n o w o c z e -
k o w a j e d o d a n e j g r u p y , a p o r ó w n u j c s n y c h , a p r z e d e w s z y s t k i m s z y b k i c h i j e d -
o t r z y m a n e w y n i k i z w y n i k a m i w b a z a c h n o z n a c z n y c h t e s t ó w o c e n y m . i n . s t a n u
d a n y c h , c z s t o m o |e m y p r e c y z y j n i e m i k r o b i o l o g i c z n e g o m a s z y n i u r z d z e D
o k r e [l i p r z y n a l e |n o [ t a k s o n o m i c z n p r o d u k c y j n y c h , s u r o w c a i p r o d u k t u .
m i k r o o r g a n i z m ó w , D l a t e g o w o s t a t n i c h l a t a c h o b s e r w u j e
m e t o d y g e n e t y c z n e n a j b a r d z i e j p r e - s i s z y b k i t r a n s f e r t e c h n i k w y k r y w a n i a
c y z y j n e t e c h n i k i w y k o r z y s t u j c e z d o b y - i i d e n t y f i k a c j i d r o b n o u s t r o j ó w z z a -
d r i n |. K a m i l a G o d e r s k a
c z e b i o l o g i i m o l e k u l a r n e j , o p i e r a j c e k r e s u m e d y c y n y k l i n i c z n e j d o p r a k t y k i
d r i n |. A r t u r S z w e n g i e l
s i g Bó w n i e n a m a t e r i a l e g e n e t y c z n y m p r z e m y s Bo w e j . A d a p t a c j a m e t o d w y m a g a
I N S T Y T U T T E C H N O L O G I I {Y W N O ZC I P O C H O D Z E N I A R O ZL I N N E G O
U N I W E R S Y T E T P R Z Y R O D N I C Z Y W P O Z N A N I U d r o b n o u s t r o j ó w , d z i k i k t ó r y m m o |- j e d n a k |e o p r a c o w a n i a w Ba [c i w y c h p r o c e -
1 0
. . . W L A B O R A T O R I U M L A B O R A T O R I U M 5 / 2 0 0 9
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d u r a n a l i z y s k o m p l i k o w a n e j m a t r y c y , j a k n i e t y p o w y c h i n i e k o r z y s t n y c h m i k r o -
j e s t |y w n o [, i d o t y c z y g Bó w n i e s p o s o b u o r g a n i z m ó w o r a z i c h m e t a b o l i t ó w ,
p r z y g o t o w y w a n i a p r ó b k i . k t ó r e m o |n a s z y b k o z i d e n t y f i k o w a
A n a l i z a m i k r o b i o l o g i c z n a |y w n o [c i i o z n a c z y ) ,
i n |. J Ó Z E F N I T K A
s p r o w a d z a s i d o o z n a c z e n i a o g ó l n e j w s k a zn i k i b e z p i e c z n e j |y w n o [c i ( w y k r y -
4 4 - 1 7 2 N i e w i e s z e k . G l i w i c , u l . P y s k o w i c k a 1 2
l i c z b y d r o b n o u s t r o j ó w o r a z s t w i e r d z e n i a w a n i e n i e p o |d a n y c h i p a t o g e n n y c h
t e l . 0 3 2 2 3 0 3 2 0 1 , f a x 0 3 2 2 3 0 3 3 0 1
e - m a i l : i n f o @ s y l a n t . p l
o b e c n o [c i i p o z i o m u p a t o g e n ó w . L i c z - m i k r o o r g a n i z m ó w w s p o s ó b s z y b k i ,
b d r o b n o u s t r o j ó w o z n a c z a s i p o p r z e z Ba t w y i p e w n y , n p . E . c o l i , E n t e r o b a c t e r ,
p o s i e w y p By t k o w e m e t o d w g Bb n o r a z K l e b s i e l l a , S a l m o n e l l a , L i s t e r i a m o n o c y -
m e t o d p o w i e r z c h n i o w . T r a d y c y j n e t o g e n e s , S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s ) ,
p r o c e d u r y s w i e l o e t a p o w e , c z a s o c h Bo n - w s k a zn i k i m a t e m a t y c z n e g o m o d e -
n e , m a t e r i a Bo c h Bo n n e , p o n a d t o c z s t o l o w a n i a w z r o s t u n i e p o |d a n y c h m i -
w y m a g a j d u |e g o d o [w i a d c z e n i a p e r s o - k r o o r g a n i z m ó w w d a n y m p r o d u k c i e ,
n e l u . Z a l e t a m i n o w o c z e s n y c h t e c h n i k s Bu |c e d o p r z e w i d y w a n i a j a k o [c i m i -
s p r z e d e w s z y s t k i m : o s z c z d n o [ c z a s u , k r o b i o l o g i c z n e j |y w n o [c i ( P r e d i c t i v e
m o |l i w o [ o c e n y l i c z e b n o [c i p o p u l a c j i , M i c r o b i o l o g y ) .
i d e n t y f i k a c j a g a t u n k o w a o r a z m o |l i w o [
z r ó |n i c o w a n i a w o b r b i e g a t u n k u . C H A R A K T E R Y S T Y K A
A N A L I Z A T O R
A N A L I Z A T O R
N o w e n a r z d z i a , j a k i e d a j n a m o s i - T E C H N I K D E T E K C J I
B A K T E R I I
g n i c i a n a u k o w e w d z i e d z i n i e i m m u n o - N a j w i k s z u w a g s k u p i a s i o b e c n i e
l o g i i , b i o l o g i i m o l e k u l a r n e j , b i o c h e m i i , n a s z y b k i c h m e t o d a c h d e t e k c j i m i k r o o r -
M O D E L
b i o l o g i i z e l e m e n t a m i c h e m i i , f i z y k i g a n i z m ó w i i c h a u t o m a t y z a c j i . P r a k t y c z -
i b i o f i z y k i , p o w i n n y b y w y k o r z y s t y w a - n e z n a c z e n i e m a j t e s t y b i o c h e m i c z n e
B A C T R A C 4 3 0 0
n e w d w ó c h p Ba s z c z y z n a c h w c e l u k o m - d o i d e n t y f i k a c j i m i k r o o r g a n i z m ó w . N a j -
C e c h y :
p l e k s o w e g o z a p e w n i e n i a b e z p i e c z e Ds t w a b a r d z i e j z n a n y m i t e s t a m i b i o c h e m i c z n y m i
w p e Bn i z a u t o m a t y z o w a n y
z d r o w o t n e g o |y w n o [c i . Z j e d n e j s t r o n y s t e s t y A P I . W z a s a d z i e o p a r t e s o n e
p o m i a r
p o w i n n o s i p r o w a d z i b a d a n i a m o n i t o - n a p r o s t y c h r e a k c j a c h c h e m i c z n y c h , k t ó - m e t o d a i m p e d a n c y j n a
z p o m i a r e m p a r a m e t r ó w
r i n g o w e o b e j m u j c e z a k Ba d p r o d u k c y j n y . r e z a c h o d z w p o d Bo |a c h w z r o s t o w y c h ;
M i E
Z d r u g i e j s t r o n y s z c z e g ó Bo w a w i e d z a o z a - n i e k i e d y z a c h o d z i p o t r z e b a d o d a n i a
z a s t p u j e m e t o d
c h o w a n i u s i m i k r o o r g a n i z m ó w w o d p o - d o p o d Bo |a p o i n k u b a c j i o d p o w i e d n i e g o
p By t k o w
w i e d z i n a o k r e [l o n e w a r u n k i [r o d o w i - o d c z y n n i k a . D o b a d a D u |y w a s i t a k |e r e d u k u j e k i l k a k r o t n i e
c z a s d e t e k c j i
s k a p o z w a l a n a o b i e k t y w n e o k r e [l e n i e m i k r o t i t r e r a p By t k o w e g o , w y k o r z y s t u j c e -
m i k r o o r g a n i z m ó w
w p By w u p r o c e s u t e c h n o l o g i c z n e g o o r a z g o i n o k u l a c j z a p o m o c w i e l o p u n k t o w e j
Ba t w a p r e p a r a t y k a d l a a n a l i z
w a r u n k ó w d y s t r y b u c j i i m a g a z y n o w a n i a p i p e t y i n o k u l a c y j n e j . W b a d a n i a c h m i -
i l o [c i o w y c h i j a k o [c i o w y c h
n a s t o p i e D s k a |e n i a m i k r o b i o l o g i c z n e g o k r o b i o l o g i c z n y c h s t o s o w a n e s r ó w n i e |
r e d u k u j e k o s z t a
a n a l i z y i n a k Ba d p r a c y
i j e g o j a k o [; w i e d z t , j a k i p r o c e d u - t e s t y i m m u n o e n z y m a t y c z n e , k t ó r e o p a r t e
w y s o k a w y d a j n o [
r y , p o w i n n y z k o l e i z a k Ba d o m z a p e w n i s n a m e t o d a c h E L I S A . S Bu | o n e g Bó w n i e
( d o 6 4 s t a n o w i s k
p l a c ó w k i n a u k o w e . d o s z y b k i e g o w y k r y w a n i a d r o b n o u s t r o -
p o m i a r o w y c h
j ó w p a t o g e n n y c h , t a k i c h j a k : S a l m o n e l l a ,
i p o w y |e j , a | d o 7 6 8 )
u p r a s z c z a i k o m p l e t u j e
C E L E I Z A K R E S L i s t e r i a , S t a p h y l o c o c c u s , E . c o l i 0 1 5 7 : H 7 .
d o k u m e n t a c j a n a l i z
O C E N Y S T A N U D o i d e n t y f i k a c j i p a Be c z e k S a l m o n e l l a
M I K R O B I O L O G I C Z N E G O o r a z g r o n k o w c ó w c h o r o b o t w ó r c z y c h
Z a s t o s o w a n i a :
M i k r o b i o l o g i c z n e b a d a n i a m o n i t o r i n g o w e s t o s o w a n e s t e s t y s e r o l o g i c z n e , c z y l i t e -
s c r e e n i n g p a t o g e n ó w
p o w i n n y z a t e m u w z g l d n i a : s t y h e m a g l u t a c y j n e o r a z t e s t y l a t e k s o w e . c a Bk o w i t a l i c z b a b a k t e r i i
t e s t y s t e r y l n o [c i
m i k r o b i o l o g i c z n o c e n s u r o w c ó w , M o d y f i k a c j p By t k o w e j m e t o d y o z n a c z a -
d e t e k c j a w z r o s t u
h i g i e n z a k Ba d u ( p e r s o n e l u , u r z d z e D n i a l i c z b y m i k r o o r g a n i z m ó w w p r o d u k -
m i k r o o r g a n i z m ó w
i p o m i e s z c z e D p r o d u k c y j n y c h ) , t a c h j e s t P e t r i f i l m , z Bo |o n y z p o d w ó j n e j
t e s t y a k t y w n o [c i
k o n f e k c j o n o w a n i e , d y s t r y b u c j i t r a n s - w a r s t w y z a w i e r a j c e j p o d Bo |e w z r o s t o w e
k i n e t y k a w z r o s t u
t e s t y i n h i b i t o r ó w
p o r t p r o d u k t ó w o r a z i c h p r z e c h o w y - w p o s t a c i |e l u r o z p u s z c z a l n e g o w z i m n e j
a n a l i z a g r z y b ó w i p l e [n i
w a n i e . w o d z i e i t w o r z c e g o b Bo n k . P e t r i f i l m y
o p t y m a l i z a c j a s k Ba d u
M o n i t o r o w a n i e , w t y m r u t y n o w a s Bu | d o o z n a c z e n i a o g ó l n e j l i c z b y b a k -
a r t y k u Bó w s p o |y w c z y c h
k o n t r o l a j a k o [c i i b e z p i e c z e Ds t w a s u r o w - t e r i i t l e n o w y c h , d r o |d |y i p l e [n i o r a z
b a d a n i a b i o f i l m ó w
i w i e l e i n n y c h
c ó w o r a z g o t o w y c h p r o d u k t ó w , w y m a g a E . c o l i . I n n a m e t o d a t o z a s t o s o w a n i e
p o s Bu g i w a n i a s i o d p o w i e d n i m i i s p e c y - p By t k i p o k r y t e j p o d Bo |a m i , w p r z y p a d k u
L e g i s l a c j a :
f i c z n y m i d l a m i k r o b i o l o g i i w s k a zn i k a - k t ó r e j p o s i e w p r z e p r o w a d z a s i p r z e z z a -
* D I N 1 0 1 1 5 / 1 0 1 2 0
m i . W s k a zn i k i m i k r o b i o l o g i c z n e m o |n a n u r z e n i e , p o c i e r a n i e l u b m e t o d k o n t a k -
+ § 3 5 L M B G ,
p o d z i e l i n a : t o w ( d o c i s k o w ) . W y k o r z y s t y w a n y j e s t O e N O R M ,
G O S S T A N D A R D , A F N O R
w s k a zn i k i j a k o [c i p r o d u k t u ( o z n a c z e - t a k |e s y s t e m p By t k i s p i r a l n e j , p o l e g a j c y
n i e t y p o w y c h , p o |d a n y c h b d z t e | n a r o z p r o w a d z e n i u p By n n e j p r ó b k i n a p o -
1 1
r e k l a m a
L A B O R A T O R I U M 5 / 2 0 0 9 . . . W L A B O R A T O R I U M
|
i k r o s k o p i a
M f l u o r e s c e n c y j n a D E F T
m a s z c z e g ó l n e z n a c z e n i e
m . i n . w o c e n i e j a k o [c i
b a k t e r i o l o g i c z n e j m l e k a .
w i e r z c h n i i t w o r z e n i u s p i r a l i A r c h i m e - n i , k t ó r e n a s t p n i e b a r w i o n e s o r a n |e m m e t r ó w i m p e d a n c y j n y c h p r ó b k i : M - v a l u e
d e s a p o p r z e z o s a d z e n i e s m u g i z a w i e s i n y a k r y d y n y . N i e b i e s k i e m i k r o k o l o n i e l i c z o - ( i m p e d a n c j a p o d Bo |a ) i E - v a l u e ( i m p e -
w s t r u m i e n i u p r ó b y z m n i e j s z a j c y m s i n e s w m i k r o s k o p i e f l u o r e s c e n c y j n y m d a n c j a e l e k t r o d ) . M i e r z a l n a i m p e d a n c j a
o d [r o d k a p By t k i d o b r z e g ó w . l u b z a p o m o c a n a l i z a t o r a . [r o d o w i s k a n a s t p u j e , g d y l i c z b a b a k t e r i i
M e t o d a D r o p l e t t e p o l e g a n a z m i e - K o l e j n m e t o d j e s t p o m i a r a k t y w n o [c i o s i g a p o z i o m 1 0 6 k o m ó r e k , a d r o |d |y
s z a n i u r o z c i e Dc z o n e j p r ó b y z u p By n n i o - m e t a b o l i c z n e j o p a r t y n a t e s t a c h r e d u k t a - i g r z y b ó w p o o s i g n i c i u p o z i o m u o k .
n y m p o d Bo |e m a g a r o w y m w s t o s u n k u z o w y c h , m e t o d z i e i m p e d y m e t r y c z n e j , m i - 1 0 4 k o m ó r e k . S t o s u j c t t e c h n i k , m o |n a
1 : 9 . N a s t p n i e z a s z c z e p i o n e p o d Bo |e k r o k a l o r y m e t r i i , c y t o m e t r i i p r z e p By w o w e j , o k r e [l i c a Bk o w i t l i c z b m i k r o o r g a n i z m ó w ,
n a n o s i s i w p o s t a c i k r o p e l k i o o b j t o [c i b i o s e n s o r a c h i p o m i a r z e i l o [c i e n z y m ó w . a p o z a s t o s o w a n i u p o |y w e k s e l e k t y w n y c h
0 , 1 m l n a p l a s t i k o w e p By t k i i p o s k o D- T e s t y r e d u k t a z o w e b a z u j n a o b s e r w a c j a c h r ó w n i e | b a k t e r i i c h o r o b o t w ó r c z y c h , d r o |-
c z o n y m c z a s i e i n k u b a c j i l i c z y s i m i - z m i a n z a c h o d z c y c h w p o |y w k a c h w w y - d |y i p l e [n i . T e c h n i k a t a z n a j d u j e z a s t o -
k r o k o l o n i e . K o l e j n m e t o d s p o m i a r y n i k u a k t y w n o [c i m e t a b o l i c z n e j m i k r o o r g a - s o w a n i e w a n a l i z i e m l e k a , s o k ó w , j a r z y n ,
t u r b i d y m e t r y c z n e . A n a l i z a t o r B i o s c r e e n n i z m ó w . E n z y m y b a k t e r y j n e , t a k i e j a k n p . p r o d u k t ó w m l e c z n y c h i p r z y p r a w . Z n a -
j e s t c a Bk o w i c i e z a u t o m a t y z o w a n y m s y s t e - d e h y d r o g e n a z a , p r z e n o s z a t o m w o d o r u m i o n u j e j s z y b k i e t e s t o w a n i e a k t y w n o [c i
m e m a n a l i z y . Z Bo |o n y j e s t z i n k u b a t o r a , z s u b s t r a t u n a b a r w n i k i t y p u r e d o x , p o w o - s z c z e p i o n e k p r z e d i c h w p r o w a d z e n i e m
w y t r z s a r k i i a u t o m a t y c z n e g o u r z d z e n i a d u j c z m i a n i c h z a b a r w i e n i a . A k t y w n o [ d o p r o c e s ó w f e r m e n t a c y j n y c h .
d o j a k o [c i o w e g o i i l o [c i o w e g o w y k r y w a - e n z y m u j e s t z a l e |n a o d l i c z b y m i k r o o r g a - M i k r o k a l o r y m e t r i a o p a r t a j e s t n a z j a -
n i a m i k r o o r g a n i z m ó w . P r ó b y l u b i c h r o z - n i z m ó w , a m i e r n i k i e m i c h i l o [c i j e s t c z a s , w i s k u w y d z i e l a n i a s i c i e p Ba p o d c z a s
c i e Dc z e n i a s z a s z c z e p i a n e a u t o m a t y c z n i e w k t ó r y m z a j d z i e z m i a n a z a b a r w i e n i a w z r o s t u m i k r o o r g a n i z m ó w . M i n i m a l n y
w p By t k a c h m i k r o t i t r e r a . W z r o s t m i k r o o r - s t o s o w a n e g o b a r w n i k a r e d o x . S t o s u j e s i p o z i o m t w o r z e n i a c i e p Ba d a j p r ó b y z a -
g a n i z m ó w m o n i t o r u j e s i p r z e z p o m i a r t a k i e b a r w n i k i , j a k : b Bk i t m e t y l e n o w y , w i e r a j c e o k . 1 0 0 0 b a k t e r i i / m l .
g s t o [c i o p t y c z n e j c o 1 0 m i n u t . r e s a z u r y n a i c h l o r e k t e t r a z o l i o w y . C y t o m e t r i a p r z e p By w o w a o p i e r a s i
M i k r o s k o p i a f l u o r e s c e n c y j n a D E F T M e t o d a i m p e d y m e t r y c z n a j e s t p o m i a - n a p o m i a r z e f i z y c z n y c h i n i e k i e d y c h e -
m a s z c z e g ó l n e z n a c z e n i e w o c e n i e j a k o [c i r e m o p o r n o [c i , j a k s t a w i a p o d Bo |e d l a m i c z n y c h c e c h k o m ó r e k , k t ó r e s z a w i e -
b a k t e r i o l o g i c z n e j m l e k a i m i s a o r a z p r z y p r d u z m i e n n e g o . W y k o r z y s t u j e s i w n i e j s z o n e w r o z t w o r z e i p o j e d y n c z o p r z e p By -
p r o d u k c j i p i w a . T e c h n i k a t a o b e j m u j e n a j n o w s z y a n a l i z a t o r m i k r o b i o l o g i c z n y w a j p r z e z s e n s o r y o p t y c z n e . K o m ó r k i
f i l t r o w a n i e p r ó b y w s t p n i e t r a k t o w a n e j B a c T r a c . K o m p l e k s o w e s k Ba d n i k i p o |y w e k p o r u s z a j s i w p By n i e o s z y b k o [c i p r z e -
e n z y m e m c e l e m l e p s z e j f i l t r a c j i p r ó b y ( s a c h a r y d y , b i a Bk a , t Bu s z c z e ) s k a t a b o l i z o - p By w u o d 1 0 m / s d o 2 0 m / s ; p o o [w i e -
i s e p a r a c j i o p t y c z n e j b a k t e r i i o d o t a c z a - w a n e d o n a Ba d o w a n y c h p r o d u k t ó w m e t a - t l e n i u i c h [w i a t Be m r e j e s t r u j e s i l i c z b
j c e g o t Ba . O r a n | a k r y d y n y b a r w i o s i a d Be b o l i z m u , t a k i c h j a k : a m i n o k w a s y , k w a s y i r o z m i a r c z s t e c z e k . W t e j m e t o d z i e
b a k t e r i e , a |y w e k o m ó r k i [w i e c n a p o - o r g a n i c z n e i i n n e n i s k o c z s t e c z k o w e m e - w y k o r z y s t u j e s i r ó w n i e | z n a k o w a n i e
m a r a Dc z o w o l u b |ó Bt o , n a t o m i a s t m a r t w e t a b o l i t y . R o z w ó j m i k r o o r g a n i z m ó w p r o - s k Ba d n i k ó w k o m ó r k o w y c h , t a k i c h j a k :
n a z i e l o n o . M o d y f i k a c j t e j m e t o d y j e s t w a d z i d o o b n i |e n i a c a Bk o w i t e j i m p e d a n c j i b i a Bk a , k w a s y n u k l e i n o w e , l i p i d y c z y
m e m b r a n e f i l t e r m i c r o c o l o n y f l u o r e s c e n t m e - p o d Bo |a . M i e r n i k i e m d e t e k c j i m i k r o o r - a n t y g e n y p o w i e r z c h n i o w e , z a p o m o c
t h o d ( M M C F ) , s t o s o w a n a d o o c e n y i l o [c i g a n i z m ó w j e s t c z a s d e t e k c j i , p o k t ó r y m f l u o r o c h r o m ó w . M e t o d t s t o s u j e s i
d r o |d |y i p l e [n i w p i w i e . U n i e r u c h o m i o n e n a s t p u j e m i e r z a l n a z m i a n a i m p e d a n c j i d o o k r e [l e n i a o g ó l n e j l i c z b y d r o |d |y i p a -
n a f i l t r a c h m i k r o o r g a n i z m y h o d u j e s i [r o d o w i s k a . D o o k r e [l e n i a p r o f i l u w z r o - Be c z e k m l e k o w y c h , c o r a z c z [c i e j j e d n a k
n a s e l e k t y w n y c h p o d Bo |a c h a g a r o w y c h , s t u d r o b n o u s t r o j ó w s k a |a j c y c h p r ó b y w y k o r z y s t y w a n a j e s t t e | d o w y k r y w a n i a
u m o |l i w i a j c y c h t w o r z e n i e s i m i k r o k o l o - w y k o r z y s t y w a n e s p o m i a r y d w ó c h p a r a - p o s z c z e g ó l n y c h g r u p m i k r o o r g a n i z m ó w .
1 2
f o t . S h u t t e r s t o c k
. . . W L A B O R A T O R I U M L A B O R A T O R I U M 5 / 2 0 0 9
|
B i o s e n s o r y d a j s y g n a B w o d p o w i e d z i j e s t c h a r a k t e r y s t y k a [c i a n y k o m ó r k o w e j , s i j e d y n i e z D N A o z n a c z a n e g o m i k r o -
n a z m i a n y [r o d o w i s k o w e , r e a g u j c n p . k t ó r a z a w i e r a c h i t y n , o r a z m e m b r a n o r g a n i z m u . W o z n a c z e n i a c h s y s t e m u
n a c i e p Bo , [w i a t Bo i p H . S e n s o r a m i s r ó |- c y t o p l a z m a t y c z n y c h , z a w i e r a j c y c h e r - G e n e - T r a k s t o s o w a n e s f l u o r e s c e n c y j -
n e g o t y p u e l e k t r o d y . g o s t e r o l . P o z i o m e r g o s t e r o l u [w i a d c z y n i e z n a k o w a n e s o n d y D N A , n a t o m i a s t
B a k t e r i e z r o d z a j u E n t e r o b a c t e r i a c e a e o j a k o [c i |y w n o [c i i m o |e b y o z n a c z a - w s y s t e m i e G e n e - P r o b e w y k o r z y s t y w a n e
w y t w a r z a j e n z y m ß - D - g l u k u r o n i d a z . n y z a p o m o c c h r o m a t o g r a f i i H P L C , s s o n d y z n a k o w a n e a k r y d y n o w y m e s -
J e s t o n p r o d u k o w a n y p r z e z E . c o l i i c z [ c h r o m a t o g r a f i i g a z o w e j i c i e n k o w a r s t w o - t r e m . W o b y d w u s y s t e m a c h o l i g o n u k l e -
s z c z e p ó w z r o d z a j u S h i g e l l a , S a l m o n e l l a w e j o r a z s p e k t r o m e t r i i w u l t r a f i o l e c i e o t y d o w e s o n d y D N A s k o m p l e m e n t a r n e
i A r i z o n a . P o z o s t a Be b a k t e r i e z r o d z i n y i p o d c z e r w i e n i . w o b e c c h a r a k t e r y s t y c z n y c h d l a a n a l i -
E n t e r o b a c t e r i a c e a e n i e w y t w a r z a j t e g o z o w a n e g o m i k r o o r g a n i z m u s e k w e n c j i
e n z y m u . M U G j e s t s u b s t r a t e m , k t ó r y N A J N O W O C Z E ZN I E J S Z E r y b o s o m a l n e g o R N A . R R N A w y s t p u j e
p o z w a l a d o [ s z y b k o w y k r y a k t y w n o [ M E T O D Y w k o m ó r c e w d u |e j l i c z b i e k o p i i , p o n i e -
t e g o e n z y m u . Z w i z e k t e n , w w y n i k u B i o l o g i a m o l e k u l a r n a s t a n o w i n a j n o - w a | j e s t i n t e g r a l n c z [c i b a k t e r y j n e g o
h y d r o l i z y p r z e z e n z y m g l u k u r o n i d a z , w o c z e [n i e j s z e n a r z d z i e d o o z n a c z e D r y b o s o m u . A n a l i z a t a k a s k Ba d a s i z c z t e -
u l e g a r o z k Ba d o w i z w y d z i e l e n i e m 4 - m e - m i k r o b i o l o g i c z n y c h . M o |n a s t o s o w a r e c h e t a p ó w . L i z p r ó b k i d l a b a k t e r i i
t y l o u m b e l i f e r o l u , w y k a z u j c e g o n i e b i e s k s o n d y , k t ó r e Bc z s i z o k r e [l o n y m G ( - ) p o w o d u j e z a s a d o w e [r o d o w i s k o ,
f l u o r e s c e n c j w [w i e t l e U V . m i k r o o r g a n i z m e m , w i r u s e m c z y t e | a d l a G ( + ) w s p o m a g a s i j l i z o z y m e m .
K o l e j n m e t o d j e s t p o m i a r m e t a b o - s p e c y f i c z n y m s k Ba d n i k i e m o r g a n i z m u , N a s t p n i e n a s t p u j h y b r y d y z a c j a , z w i -
l i t ó w p o [r e d n i c h l u b p r o d u k t ó w k o D- a n a s t p n i e w y k o r z y s t y w a d e t e k c j z a n i e h y b r y d u i d e t e k c j a . D o u n i k a l n y c h ,
c o w y c h . O z n a c z a s i n p . p i r o g r o n i a n . k o m p l e k s u s o n d a a n a l i z o w a n y s k Ba d - s s i a d u j c y c h z e s o b r e g i o n ó w t e j s a m e j
W t y m c e l u w y k o r z y s t u j e s i m e t o d e n z y - n i k . N a j c z [c i e j s t o s o w a n y m i s o n d a m i c z s t e c z k i r R N A t e s t o w a n e g o o r g a n i z m u
m a t y c z n e j r e d u k c j i k w a s u p i r o g r o n o w e g o s k w a s y n u k l e i n o w e d o d e t e k c j i D N A d o d a w a n e s i d w i e s o n d y w y k a z u j c e
p r z e z d e h y d r o g e n a z m l e c z a n o w . l u b R N A o r a z c z s t e c z k i p r z e c i w c i a B h o m o l o g i . J e d n a u m o |l i w i a w i z a n i e
I n n z n a n m e t o d j e s t b i o l u m i n e - d o d e t e k c j i b i a Be k , w g l o w o d a n ó w l u b h y b r y d u z n o [n i k i e m d z i k i p o Bc z e -
s c e n c y j n y p o m i a r A T P . W s z y s t k i e |y w e l i p i d ó w . J e |e l i s e k w e n c j a z a s a d w s o n - n i u d o j e j 3 k o Dc a p o l i d A , n a t o m i a s t
k o m ó r k i z a w i e r a j A T P n u k l e o t y d , d z i e j e s t k o m p l e m e n t a r n a d o s e k w e n - d r u g a s Bu |y d o d e t e k c j i , g d y | d o j e j o b y -
k t ó r y p e Bn i r o l m a g a z y n u e n e r g i i . S t - c j i c h a r a k t e r y s t y c z n e j d l a o z n a c z a n e g o d w u k o Dc ó w p r z y Bc z o n e s s p e c j a l n e
|e n i e A T P m o |e b y m i e r z o n e w p r o s t y m i k r o o r g a n i z m u , w ó w c z a s s o n d a w i |e z w i z k i c h e m i c z n e w y w o Bu j c e z m i a n
s p o s ó b w r e a k c j i z z a s t o s o w a n i e m l u c y -
r e k l a m a
f e r y n y i l u c y f e r a z y . W w y n i k u t e j r e a k c j i
w y d z i e l a n e j e s t [w i a t Bo w i l o [c i a c h r ó w -
n o w a |n y c h d o i l o [c i A T P . S t o s u j c t m e -
t o d , w c i g u 1 m i n u t y m o |n a o c e n i
s t a n s a n i t a r n y p o w i e r z c h n i .
T e s t L A L j e s t s z y b k m e t o d w y k r y w a -
n i a e n d o t o k s y n , c z y l i o b e c n o [c i b a k t e r i i
G ( - ) . S k Ba d a j s i o n e z k o m p l e k s ó w l i p i -
d ó w i p o l i s a c h a r y d ó w o r ó |n y m s k Ba d z i e
c h e m i c z n y m . T e c h n i k i r a d i o m e t r y c z n e
s o p a r t e n a p o m i a r z e p o b i e r a n i a l u b
z n a k o w a n i a s u b s t r a t ó w l u b p r o d u k t ó w .
N a j c z [c i e j s t o s o w a n e m e t o d y r a d i o -
m e t r y c z n e w y k o r z y s t u j p o m i a r 1 4 C O 2
t w o r z o n e g o p r z e z m i k r o o r g a n i z m y
w w y n i k u m e t a b o l i z o w a n i a z n a k o w a n y c h
i z o t o p o w o s u b s t r a t ó w , n p . g l u k o z y c z y
l a k t o z y , w p r o w a d z o n y c h d o p o d Bo |a
h o d o w l a n e g o . S z y b k o [ c z a s u d e t e k c j i
j e s t s k o r e l o w a n a z p o c z t k o w l i c z b
m i k r o o r g a n i z m ó w w b a d a n e j p r ó b i e .
T r u d n o [ w u s u w a n i u o d p a d ó w i z o t o -
p o w y c h w y k l u c z a t m e t o d z z a s t o s o -
w a D w a n a l i z i e |y w n o [c i . R ó |n i c o w a n i e
d o r o d z a j ó w m o |l i w e j e s t n a p o d s t a w i e
a n a l i z y l o t n y c h p r o d u k t ó w k o Dc o w y c h
p r z y p o m o c y c h r o m a t o g r a f i i g a z o w e j .
M o |n a s t o s o w a j d o b a k t e r i i z r o d z a -
j u B a c i l l u s i C l o s t r i d i u m . W p r z y p a d k u
o z n a c z e D d o t y c z c y c h g r z y b ó w m o |l i w a
1 3
L A B O R A T O R I U M 5 / 2 0 0 9 . . . W L A B O R A T O R I U M
|
T E C H N O L O G I A D E T E K C J I Z A L E T Y W A D Y
r ó |n i c o w a n i e |y w y c h / m a r t w y c h k o m ó r e k ,
m i n i m a l n a i n t e r f e r e n c j a z m a t r y c p r ó b k i ,
w y s o k a s p e c y f i c z n o [,
Ba t w e w i z a n i e ( h y b r y d y z a c j a ) ,
H y b r y d y z a c j a k a n a p k o w a ( s a n d w i c h n i e r o z r ó |n i a n i e s e r o t y p u l u b p o d g a t u n k u ,
m o |l i w o [ o z n a c z a n i a w i e l u p r ó b e k ( p By t k a
h y b r i d i s a t i o n ) A d v a n t a g e s o f H y b r i S c a n ® l i m i t o w a n e p r z e z n a c z e n i e s o n d y
z 9 6 m i k r o s t u d z i e n k a m i ) ,
o z n a c z e n i a j a k o [c i o w e i i l o [c i o w e ,
d e t e k c j a m i k r o o r g a n i z m ó w n i e r o s n c y c h
w w a r u n k a c h l a b o r a t o r y j n y c h
b r a k r o z r ó |n i e n i a m i d z y |y w y m i i m a r t w y m i
d u |a w y d a j n o [,
k o m ó r k a m i ,
P C R c z u Bo [,
d u |a i n t e r f e r e n c j a z m a t r y c ,
o z n a c z e n i a i l o [c i o w e
i n h i b i c j a p o l i m e r a z y
r o z r ó |n i a n i e s e r o t y p u l u b p o d g a t u n k u ,
n i s k a c z u Bo [,
m o |l i w o [ o z n a c z a n i a w i e l u p r ó b e k ( p By t k a
E L I S A n i s k a s p e c y f i c z n o [, r e a k t y w n o [ k r z y |o w a ,
z 9 6 m i k r o s t u d z i e n k a m i ) ,
w o l n a i d r o g a p r o c e d u r a
o z n a c z e n i a j a k o [c i o w e i i l o [c i o w e
c z a s o c h Bo n n e ( o k o Bo 1 0 d n i ) ,
r e l a t y w n i e n i e d r o g i e ,
b r a k d e t e k c j i m i k r o o r g a n i z m ó w n i e
M e t o d y k o n w e n c j o n a l n e p r o s t e p r o c e d u r y ,
r o s n c y c h w w a r u n k a c h l a b o r a t o r y j n y c h ,
( b a z u j c e n a h o d o w l i k o m ó r e k ) s p e c y f i c z n e ,
n i s k a w y d a j n o [,
s z e r o k o a k c e p t o w a n e m e t o d y
w y m a g a j d u |e g o n a k Ba d u p r a c y
T a b e l a 1 . W a d y i z a l e t y r ó |n y c h t e c h n i k d e t e k c j i m i k r o o r g a n i z m ó w ( n a p o d s t a w i e A d v a n t a g e s o f H y b r i S c a n ® o v e r o t h e r d e t e c t i o n t e c h n i q u e s , p o b r a n o z e s t r o n y i n t e r n e t o w e j w w w . s i g m a a l d r i c h . c o m )
b a r w y l u b l u m i n e s c e n c j . W s t a w i e n i e m e t o d a i m m u n o e n z y m a t y c z n a E L I S A . K o l e j n m e t o d s t a n o w i i d e n t y f i k a c j a
d o t e s t o w a n e j m i e s z a n i n y s t a Be g o n o - P r z e c i w c i a Bo w s t o s u n k u d o t e s t o w a n e g o w i d m a w p o d c z e r w i e n i , k t ó r e j e s t o d z w i e r -
[n i k a z a w i e r a j c e g o p o l i d T u m o |l i w i a m i k r o o r g a n i z m u p o Bc z o n e j e s t z e n z y - c i e d l e n i e m s k Ba d u c h e m i c z n e g o k o m ó r e k
w y c h w y c e n i e p o w s t a j c y c h w c z e [n i e j m e m . P o r e a k c j i p r z e c i w c i a Bo a n t y g e n m i k r o o r g a n i z m ó w . R e p r e z e n t u j e o n o b i a B-
h y b r y d ó w . D e t e k c j a o d b y w a s i p o p r z e z o b m y w a n y j e s t n a d m i a r p r z e c i w c i a Ba , k a , e l e m e n t y [c i a n y k o m ó r k o w e j i b Bo n y
p o m i a r z m i a n y b a r w y ( G e n e - T r a k ) l u b a o b e c n o [ o r g a n i z m u m o |e b y s t w i e r - c y t o p l a z m a t y c z n e j o r a z k w a s y n u k l e i n o w e .
l u m i n e s c e n c j i ( G e n e - P r o b e ) w y w o Ba n y c h d z o n a p r z e z d o d a n i e o d p o w i e d n i e g o A n a l i z a k o r e l a c j i w i d m u m o |l i w i a r ó |n i c o -
p o z a n u r z e n i u n o [n i k a z p r z y Bc z o n y m s u b s t r a t u , z m i e n i a j c e g o k o l o r w o b e c - w a n i e s z c z e p ó w . J e d n a k |e n i e k t ó r e z o b s e r -
h y b r y d e m w s p e c j a l n y c h o d c z y n n i k a c h . n o [c i e n z y m u . Z m i a n a k o l o r u d o w o d z i w o w a n y c h p r |k ó w m o g By b y j u | o b e c n i e
S o n d y w y m a g a j o b e c n o [c i 1 0 5 - 1 0 6 k o - o b e c n o [c i d a n e g o o r g a n i z m u . W t e c h n i c e b y p r z y p i s a n e g r u p o m f u n k c y j n y m o k r e -
p i i c h a r a k t e r y s t y c z n e j s e k w e n c j i D N A . i m m u n o l o g i c z n e j s t o s o w a n e s l a t e k s o - [l o n y c h z w i z k ó w c h e m i c z n y c h s t r u k t u r
M o |n a t o p o k o n a p o p r z e z p o w i e l e n i e w e , r ó |n o k o l o r o w e k u l e c z k i , s p e c y f i c z n e k o m ó r k o w y c h . W i d m a w p o d c z e r w i e n i
D N A c h a r a k t e r y s t y c z n e g o m i k r o o r g a - d l a p o s z c z e g ó l n y c h m i k r o o r g a n i z m ó w . s u n i k a l n e d l a p o s z c z e g ó l n y c h o r g a n i z m ó w ,
n i z m u t e c h n i k P C R . I n n m e t o d j e s t O b e c n o [ t e s t o w a n y c h o r g a n i z m ó w w i c d y s p o n u j c o d p o w i e d n i m i b a z a m i
a n a l i z a p o l i f o r m i z m u m i e j s c r e s t r y k c y j - w r o z t w o r z e p o w o d u j e Bc z e n i e s i d a n y c h , m o |n a j e p o r ó w n a , i o b l i c z a j c
n y c h R F L P . P o l e g a o n a n a w y i z o l o w a n i u z e s o b k u l e c z e k z e w z g l d u n a r e a k c j w s p ó Bc z y n n i k k o r e l a c j i , u s t a l i p r z y n a -
D N A z t e s t o w a n e g o m i k r o o r g a n i z m u , p r z e c i w c i a Ba z a n t y g e n a m i o b e c n y m i l e |n o [ d i a g n o s t y c z n m i k r o o r g a n i z m u .
t r a w i e n i u o d p o w i e d n i o d o b r a n y m i e n - n a p o w i e r z c h n i d r o b n o u s t r o j ó w , c o j e s t S z y b k i w i a r y g o d n a m e t o d i d e n t y -
z y m a m i r e s t r y k c y j n y m i i r o z d z i e l e n i u w i d o c z n e w f o r m i e p o w s t a j c y c h a g r e g a - f i k a c j i i k l a s y f i k a c j i m i k r o o r g a n i z m ó w
z e w z g l d u n a w i e l k o [ p o w s t a j c y c h t ó w . P r z e c i w c i a Ba m o g b y p r z y Bc z o n e j e s t s p e k t r o m e t r i a M A L D I - T O F ( m a t r i x -
f r a g m e n t ó w D N A m e t o d e l e k t r o f o r e - d o k u l e c z e k m a g n e t y c z n y c h i w ó w c z a s - a s s i s t e d l a s e r d e s o r p t i o n / i o n i z a t i o n - t i m e
z y |e l o w e j . N a s t p n i e r o z d z i e l a n e f r a g - k o m ó r k i t e s t o w a n y c h o r g a n i z m ó w b d o f f l i g h t ) . W s p ó Bc z e s n e s y s t e m y s p e k t r o m e -
m e n t y p r z e n o s z o n e s n a m e m b r a n s i z n i m i Bc z y . M a g n e s u m i e s z c z o n y t r i i M A L D I - T O F u m o |l i w i a j w y k o n a n i e
i d o d a w a n a j e s t c h e m i l u m i n e s c e n c y j n i e p o d p o j e m n i k i e m z t e s t o w a n p r ó b k a n a l i z y p o z w a l a j c e j n a j e d n o z n a c z n
z n a k o w a n a , s p e c y f i c z n a s o n d a g e n e t y c z - p o w o d u j e p r z y c i g a n i e k u l e c z e k w r a z i d e n t y f i k a c j b a k t e r i i , d r o |d |y c z y g r z y -
n a . Z r ó |n o r o d n o [c i s e k w e n c j i w y n i k a z t e s t o w a n y m i d r o b n o u s t r o j a m i i o c z y s z - b ó w w c i g u k i l k u m i n u t .
o b e c n o [ m i e j s c r e s t r y k c y j n y c h l u b i c h c z e n i e r o z t w o r u . I m m u n o m a g n e t y c z n a Z a l e t y i w a d y w y b r a n y c h t e c h n i k d e -
b r a k , a k o n s e k w e n c j t e g o j e s t h y b r y d y - s e p a r a c j a u s u w a o k r e [l o n e m i k r o o r g a - t e k c j i m i k r o o r g a n i z m ó w p r z e d s t a w i o n o
z a c j a s o n d z f r a g m e n t a m i o r ó |n e j w i e l - n i z m y i s t o s o w a n a j e s t d o u s u w a n i a w t a b e l i 1 . W y b ó r w Ba [c i w e j t e c h n i k i
k o [c i . S o n d y p o z w a l a j u z y s k a r o z k Ba d k o m ó r e k S a l m o n e l l a z p r z y p r a w i E . c o l i w a r u n k o w a n y j e s t c z a s e m , j a k i m d y s p o -
p r |k ó w u n i k a l n y d l a d a n e g o s z c z e p u 0 1 5 7 : H 7 z |y w n o [c i . J e [l i p r z y k Ba d o - n u j e s i d o m o m e n t u u z y s k a n i a w y n i k u ,
m i k r o o r g a n i z m u . w o p r z e c i w c i a Ba s z c z e p ó w S a l m o n e l l a [c i [l e s p r e c y z o w a n y m c e l e m i z a k r e s e m
M e t o d y i m m u n o l o g i c z n e b a z u j p o Bc z y m y z c z e r w o n y m i k u l e c z k a m i , i d e n t y f i k a c j i , l i c z b p r ó b e k o r a z a k c e p -
n a z a s t o s o w a n i u p r z e c i w c i a B r e a g u j c y c h a z n i e b i e s k i m i p r z e c i w c i a Ba L i s t e r i a t o w a n y m i k o s z t a m i a n a l i z . qð
z a n t y g e n a m i o b e c n y m i n a p o w i e r z c h - s p p . , t o i s t n i e j e m o |l i w o [ i d e n t y f i k o -
P i [m i e n n i c t w o d o s t p n e n a s t r o n i e
n i t e s t o w a n e g o m i k r o o r g a n i z m u . N a j - w a n i a o b e c n o [c i k i l k u r o d z a j ó w m i k r o -
w w w . l a b o r a t o r i u m . e l a m e d . p l
p o w s z e c h n i e j s t o s o w a n t e c h n i k j e s t o r g a n i z m ó w .
1 4
P i [m i e n n i c t w o
1 . S t a n l e y P . E . , M c C a r t h y B . J . , S m i t h e r R . : A T P L u m i n e s c e n c e r a p i d m e t h o d s
i n m i c r o b i o l o g y . B l a c k w e l l S c i . P u b . , O x f o r d 1 9 8 9 .
2 . B a r k e r J . M . , G r i f f i t h s M . W . , C o l l i n s - T h o m p s o n D . L . : B a c t e r i a l b i o l u m i n e s c e n c e
a p p l i c a t i o n s i n f o o d m i c r o b i o l o g y . J . F o o d P r o t . , 1 9 9 2 , 5 5 , 6 2 - 7 0 .
3 . C z a j k o w s k a D . : N o w o c z e s n e m e t o d y d i a g n o s t y c z n e w m i k r o b i o l o g i i |y w n o [c i .
M a t e r i a By K o n f e r e n c j i N a u k o w e j B e z p i e c z e Ds t w o m i k r o b i o l o g i c z n e p r o d u k c j i
|y w n o [c i , P T T {, W a r s z a w a 1 9 9 7 , 8 3 - 9 3 .
4 . C z a c z y k K . , T r o j a n o w s k a K . : Z a s t o s o w a n i e s z y b k i c h m e t o d o z n a c z a n i a i
i d e n t y f i k a c j i d r o b n o u s t r o j ó w . P r z e m y s B S p o |y w c z y , 2 0 0 6 , 2 , 1 4 - 2 1 .
5 . P a l k a R . : Z a s t o s o w a n i e o s i g n i b i o l o g i i m o l e k u l a r n e j w m i k r o b i o l o g i i
|y w n o [c i . P r z e m y s B S p o |y w c z y , 2 0 0 7 , 2 , 6 - 8 .
6 . S a Be k A . : N o w o c z e s n e m e t o d y b a d a D m i k r o b i o l o g i c z n y c h . P r z e m y s B
S p o |y w c z y , 2 0 0 4 , 2 , 2 8 - 3 2 .
7 . I l i n i c k a - O l e j n i c z a k O . , H o r n e c k a D . : P r o g n o z o w a n i e w m i k r o b i o l o g i i |y w n o [c i .
P r z e m y s B S p o |y w c z y , 1 9 9 5 , 2 , 5 7 - 5 8 .
8 . H y b r i S c a n ® R a p i d T e s t S y s t e m s . M a t e r i a By r e k l a m o w e o n - l i n e ,
w w w . s i g m a a l d r i c h . c o m .
9 . M e n g J . , D o y l e M . P . : I n t r o d u c t i o n . M i c r o b i a l f o o d s a f e t y . M i c r o b e s a n d
I n f e c t i o n , 2 0 0 2 , 3 9 5 - 3 9 7 .
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