3870137231

35

STRATEGIE NMR WYZNACZANIA STRUKTUR BIAŁEK W ROZTWORZE

spinowych ³J(H_N,H_a), dla których najbardziej wiarygodną parametryzację równania Karplusa przedstawiono na Rys. 6 [34].

Rysunek 6. Zależność wicynalnej stałej sprzężenia spinowego \J(H_N,HJ od kąta dwuściennego <j>. W równaniu Karplusa mającym postać J = Acos²ę> ⁺ Bcosęj + C, współczynniki przyjmują następujące wartości:

A = +6,51 Hz, B = -1,76 Hz oraz C = +1,60 Hz [34] Ze względu na przyjętą definicję kąta <j)

zachodzi relacja <p = </> + 60°

Średnie białka, 10 kDa < M <30 kDa

Białka o masach z przedziału 10-30 kDa do badań NMR znakuje się jednorodnie izotopami ^l5N i ^l3C. Przypisania sygnałów ‘H, ^l5N i ^,3C są wykonywane w oparciu o wielojądrowe, wielowymiarowe techniki, w których do skorelowania sygnałów wykorzystuje się duże, heterojądrowe sprzężenia spinowe [20, 25] (Rys. 7).

Rysunek 7. Fragment łańcucha polipeptydowego z zaznaczonymi wartościami heterojądrowych sprzężeń spinowych wykorzystywanych do przypisania sygnałów w ^lsN/ⁿC podwójnie znakowanych białkach.

Wszystkie wartości podano w Hz