CUKRY
GLIKOZA
HOOC
COOH
NH
2
H
2
N
SH
HOOC
HOOC
H
2
N
L-
α
-AA
(Kwas
α
-aminoadypinowy) L-Cys L-Val
HOOC
NH
2
N
O
H
COOH
SH
L-a-AA-L-Cys
(L-
α
-aminoadypinoilo)-L-
α
-cysteina)
HOOC
NH
2
N
O
H
N
O
H
SH
COOH
D-Val
N
S
COOH
N
O
H
O
H
2
N
COOH
L
L
D
N
S
COOH
N
O
H
O
SCoA
O
L-
α
-AA
O
H
2
N
COOH
OH
2-oksoglutaran acetylo-CoA acetylo-Ser L-Met pirogronian
m e t a b o l i t y p o s r e d n i e p r z e m i a n p o d s t a w o w y c h
syntetaza ACV
syntetaza ACV
syntaza IPN(cyklaza)
izopenicylina N
cylaza/amidaza
+ acylotransferaza
BIOGENEZA PENICYLINY G
Zasada ekstrakcji reekstrakcji penicyliny G
CH
2
CO NH
N
S
O
CH
3
COOH
CH
3
CH
2
CO NH
N
S
O
CH
3
COOH
CH
3
pH 2.5
pH 7
faza organiczna
faza wodna
Schemat wydzielania acylazy penicylinowej
produkowanej przez E. coli
Zawiesina pochodowlana
Wirowania lub filtracja
Biomasa
-
dezintegracja komórek
-wirowanie
Supernatant
-Wytrącanie białek (NH
4
)
2
SO
4
lub PEG)
-rozpuszczanie w wodzie
Roztwór białek
Stężony roztwór acylazy
Czysty enzym
-Chromatografia adsorpcyjna lub jonowymienna
-dializa, ultrafiltracja
-wytrącanie,
-krystalizacja,
-wirowanie
Enzymatyczna i chemiczna hydrolizy penicyliny G
CH
2
CO NH
N
S
O
CH
3
COOH
CH
3
CH
2
Cl
CH
3
COSiMe
3
CH
3
O
S
N
N
C
Me
3
SiCl/PCl
5
CH
2
C N
N
S
O
CH
3
COSiMe
3
CH
3
OEt
EtOH
N
S
O
CH
3
COOH
CH
3
H
2
N
CH
2
COOH
Acylaza
penicylinowa
H+
H
2
O
WYDZIELANIE KWASU
6-AMINOPENICYLANOWEGO
Zawiesina poreakcyjna
Roztwór wyjściowy
Faza wodna
Roztwór kwasu 6-AP
Kryształy kwasu 6-AP
-Oddzielenie biokatalizatora
-Schłodzenie
-Zakwaszenie (pH 1.5-2.5)
-Ekstrakcja penicyliny kw. fenylooctowego
-Neutralizacja (pH 7.8, NaOH)
-Zatężanie (<30
o
C)
-Wytrącanie (pH 4.2 - 4.3 HCl lub H
2
SO
4
)
-Odsączanie
-Przemywanie wodą i acetonem
-Suszenie
Wydzielanie acylazy penicyliny G
Zawiesina pochodowlana
biomasa
supernatant
roztwór białek
stężony roztwór acylazy
wirowanie
Dezintegracja komórek
wirowanie
Wytrącanie białek [(NH
4
)
2
SO
4
, lub PEG
rozpuszczenie w H
2
O
Chromatografia (adsorpcyjna lub
jonowymienna), dializa, wirowanie
Wytrącanie, krystalizacja,
wirowanie
czysty enzym
Otrzymywanie oksacykliny z użyciem chlorku
kwasowego
N
S
N
H
2
CH
3
CH
3
COOH
O
Cl
O
N
O
CH
3
1. NaHCO
3
2.aceton/H
2
O
O
N
O
CH
3
NH
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
oksacylina
N
S
N
H
2
CH
3
CH
3
COOH
O
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
R
O
R
Cl
O
R
O
CH
3
O
O
1. slaba zasada
2.pH 2, ekstrakcja
3. utworzenie soli
1. slaba zasada
2.pH 2, ekstrakcja
3. utworzenie soli
N
S
N
H
2
CH
3
CH
3
COOH
O
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
R
O
R
Cl
O
R
O
CH
3
O
O
1. slaba zasada
2.pH 2, ekstrakcja
3. utworzenie soli
1. slaba zasada
2.pH 2, ekstrakcja
3. utworzenie soli
Acylowanie kwasu 6-aminopenicylanowego
SYNTEZA AMOKSYCYLINY
N
S
N
H
2
CH
3
CH
3
COOH
O
O
H
NH
2
COOH
1. NaOH/CH
3
OH
2. CH
3
COCN
2
COOCH
3
O
H
N
COOH
H
O
OCH
3
C
H
3
O
H
N
COOCOOEt
H
O
OCH
3
C
H
3
ClCOOEt
H
2
O + aceton(-10
o
C)
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
NH
N
H
O
OCH
3
C
H
3
O
H
O
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
NH
NH
2
O
H
O
N
S
N
H
2
CH
3
CH
3
COOH
O
O
H
NH
2
COOH
1. NaOH/CH
3
OH
2. CH
3
COCN
2
COOCH
3
O
H
N
COOH
H
O
OCH
3
C
H
3
O
H
N
COOCOOEt
H
O
OCH
3
C
H
3
ClCOOEt
H
2
O + aceton(-10
o
C)
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
NH
N
H
O
OCH
3
C
H
3
O
H
O
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
NH
NH
2
O
H
O
amoksycylina
SYNTEZA METACYLINY
N
S
N
H
2
CH
3
CH
3
COOH
O
COOH
OCH
3
OCH
3
+
N
N
NH
NH
O
DCCI
(N,N'-dicykloheksylokarbodiimid)
DCC
(N,N'-dicykloheksylomocznik)
N
S
N
CH
3
CH
3
COOH
O
CH
3
O
H
3
CO
OCH
3
metycylina
N
S
N
H
2
CH
3
CH
3
COOH
O
HNO
2
N
S
N
+
CH
3
CH
3
COOH
O
N
Br
2
N
S
Br
CH
3
CH
3
COOH
O
Br
N
S
Br
CH
3
CH
3
COOH
O
Br
O
O
KMnO
4
/H
3
PO
4
H
2
, Pd/C
N
S
CH
3
CH
3
COOH
O
O
O
sulbaktam
N
S
NH
CH
3
CH
3
COOH
O
O
N
O
O
CH
3
OCH
3
N
S
C
H
3
C
H
3
HOOC
O
O
O
+
N
S
NH
CH
3
CH
3
O
O
N
O
O
CH
3
OCH
3
O
O
O
O
N
S
CH
3
C
H
3
O
O
O
sultamycylina
SYNTEZA SULBAKTAMU I SULTAMYCYLIN
Y
koniec 11 marca 2012
BIOGENEZA CEFALOSPORYNY C
COOH
HOOC
NH
2
O
NH
2
S
H
OH
O
NH
2
CH
3
C
H
3
OH
L-Cys
L-Val
L-AA-L-Cys
SYNTETAZA
TRIPEPTYDU
ACV
L-AA-L-Cys-D-Val (DLL-ACV)
N
S
O
CH
3
CH
3
COOH
NH
O
N
H
2
COOH
cyklaza
L
N
S
O
CH
3
CH
3
COOH
NH
O
N
H
2
COOH
epimeraza
D
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
3
COOH
ekspandaza
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
2
OH
COOH
oksygenaza
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
COOH
O
CH
3
O
izopenicylina N
(LLD)
penicylina N
(DLD)
deacetoksycefalosporyna C
deacetylocefalosporyna C
cefalosporyna C
acetylotransferaza
S
CH
3
CH
2
CoA
BIOGENEZA CEFAMYCYN U PROMIENIOWCÓW
CEFAMYCYNA C
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
2
OH
COOH
deacetylocefalosporyna C
cefalosporyna C
S
CH
3
CH
2
CoA
R
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
O-karbamoilodeacetylocefalosporyna C
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
OCH
3
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
OCH
3
7-a-metoksycefalosporyna C
N
O
NH
S
COOH
OH
R
OCH
3
karbamoilofosforan
N
O
NH
S
COOH
O
R
OCH
3
O
OCH
3
OH
O
H
OH
cefamycyna C
cefamycyna B
OSO
3
H
C
H
3
O
H
OH
cefamycyna A
karbamoilofosforan
CEFAMYCYNA C
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
2
OH
COOH
deacetylocefalosporyna C
cefalosporyna C
S
CH
3
CH
2
CoA
R
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
O-karbamoilodeacetylocefalosporyna C
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
OCH
3
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
OCH
3
7-a-metoksycefalosporyna C
N
O
NH
S
COOH
OH
R
OCH
3
karbamoilofosforan
N
O
NH
S
COOH
O
R
OCH
3
O
OCH
3
OH
O
H
OH
cefamycyna C
cefamycyna B
OSO
3
H
C
H
3
O
H
OH
cefamycyna A
karbamoilofosforan
OTRZYMYWANIE KWASU 7-AC Z CEFALOSPORYNY C
OTRZYMYWANIE KWASU 7-ADC
Z KWASU 7-AC
N
S
O
COO
H
R
3
O
H
2
N
CH
3
O
N
S
O
COO
H
R
3
CH
3
H
2
N
H
2
/Ni(Ra)
KWAS 7-AMINO-
CEFALOSPORANOWY(7-AC)
KWAS 7-AMINO-3-DEACETOKSY-
CEFALOSPORANOWY (7-ADC)
SYNTEZA KWASU 7-ADC
N
S
O
COOH
O
N
CH
3
O
O
S
H
CEFALOTYNA
(antybiotyk injekcyjny I generacji )
kw. octowy
pirydyna
N
S
O
COO
N
N
O
S
H
CEFALORYDYNA
MODYFIKACJA CEFALOSPORYN W POZYCJI 3
N
S
N
CH
3
CH
3
COOH
O
O
H
N
S
CH
3
CH
3
COOSi(CH
3
)
3
O
a. CH
3
COOH
b. BSA lub BSU
N
S
CH
2
CH
3
COOSi(CH
3
)
3
O
H
N
S
OH
COOSi(CH
3
)
3
CH
3
CH
3
C
O
N
S
O
COOH
CH
3
N
O
H
KWAS 7-FENYLOACETYLO-
3-DEACETOKSYCEFALOSPORANOWY
ksylen
TosOH
∆
(CH
3
CO)
2
O
DMF,
130oC
N
H
Br
∆
BSA- N,N-bis(trimetylsilyl)acetamid
BSU - N,N'-bis(trimetylsililo)mocznik
WYTWARZANIE KWASU 7-FENYLOACETYLO-ADC Z
PENICYLINY G
D
O
OCH
CH
3
N
N
N
N
S
H
N
COONa
O
S
N
O
N
S
O
COOh
H
2
N
O
CH
3
O
OH
COOH
D
HCOOH
Ac
2
O
O
COOH
O
CH
D
SOCl
2
O
COCl
O
CH
D
N
N
N
N
CH
3
S
H
2
N
COOH
O
S
N
+
BSA(
SPRAWDZIæ
STRUKTURE ZE STR 164)
N
N
N
N
CH
3
S
N
COOSi(CH
3
)
3
O
S
N
(CH
3
)
3
SI
H
CEFAMANDOL NAFAT
SYNTEZA CEFAMANDOLU
Z KWASU 7-AC I KWASU MIGDAŁOWEGO
N
S
O
COOCH
3
CH
3
H
2
N
NH
COOH
O
O
C(CH
3
)
3
+
C
NH
O
O
(CH
3
)
3
C
O
N
CH
3
COOCH
3
O
S
N
H
C
NH
O
O
(CH
3
)
3
C
O
N
CH
3
COOH
O
S
N
H
C
NH
2
O
N
CH
3
COOH
O
S
N
H
CEFALEKSYNA
(antybiotyk injekcyjny I generacji )
Synteza cefaleksyny
O
O
N
O
CH
3
COOK
CH
3
S
N
H
CH
3
COOCH
2
CCL
3
CH
3
S
N
ClCOOCH
2
CCl
3
-CO
2
CH
3
COOCH
2
CCL
3
CH
3
S
N
O
COOOH
Cl
(CH
3
CO)
2
O
DMF
O
H
N
S
CH
2
CH
3
Cl
3
CCH
2
O
O
H
S
N
CH
3
O
O
OCH
2
CCl
3
O
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
N
O
C
6
H
5
H
O
PCl
5
pirydyna
benzen
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
N
O
C
6
H
5
Cl
CH
3
OH
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
N
O
C
6
H
5
OCH
3
H
2
O
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
H
2
N
C
6
H
5
COOH
NCOOC(CH
3
)
3
H
D
C
6
H
5
N
H
C
N
O
CH
3
COOCH
2
CCl
3
S
N
O
H
OC(CH
3
)
3
O
C
6
H
5
NH
3
N
O
CH
3
COO
S
N
O
H
CEFALEKSYNA
odblokowanie
Synteza cefaleksyny z penicyliny V
-
schłodzenie do +10
o
C
-zakwaszenie do pH 5,5 (kwas octowy)
-dodatek ziemi okrzemkowej
B
ę
bnowy filtr pró
ż
niowy
H2O
Grzybnia odpadowa
filtrat
1.zakwaszenie do pH 2,8 do 3,0 (kationit);
2.ogrzewanie w 37
o
C –
nast
ę
puje rozkład
penicyliny N;
3. schłodzenia do 0
o
C
Kolumna z anionitem silnie
zasadowym (eliminacja anionów)
Kolumna z anionitem słabo zasa-
dowym (elucja cefalosporyny C)
Elucja kwasem octowym i pirydyn
ą
(pH 5,0 – 5,5, temp. 0
o
C)
eluat
1. Zat
ęż
anie;
2. wytr
ą
canie bezw. acetonem
3. Filtracja;
4.suszenie pod zmniejszonym
Surowa cefalosporyna C
Rozpuszczenie w wodzie
Neutralizacja rozc. NaOH
Kolumna z kationitem (usuwanie pirydyny)
1.
Zat
ęż
anie (pró
ż
nia)
2. Krystalizacja
3. Wirowanie
4. Przemywanie etanolem, suszenie
Sól sodowa
cefalosporyny C
Schemat wyodr
ę
bmniania i oczyszczania
cefalosporyny C
Zawiesina
pofiltracyjna
BIOGENEZA CEFALOSPORYNY C
COOH
HOOC
NH
2
O
NH
2
S
H
OH
O
NH
2
CH
3
C
H
3
OH
L-Cys
L-Val
L-AA-L-Cys
SYNTETAZA
TRIPEPTYDU
ACV
L-AA-L-Cys-D-Val (DLL-ACV)
N
S
O
CH
3
CH
3
COOH
NH
O
N
H
2
COOH
cyklaza
L
N
S
O
CH
3
CH
3
COOH
NH
O
N
H
2
COOH
epimeraza
D
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
3
COOH
ekspandaza
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
2
OH
COOH
oksygenaza
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
COOH
O
CH
3
O
izopenicylina N
(LLD)
penicylina N
(DLD)
deacetoksycefalosporyna C
deacetylocefalosporyna C
cefalosporyna C
acetylotransferaza
S
CH
3
CH
2
CoA
BIOGENEZA CEFAMYCYN U
PROMIENIOWCÓW
CEFAMYCYNA C
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
2
OH
COOH
deacetylocefalosporyna C
cefalosporyna C
S
CH
3
CH
2
CoA
R
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
O-karbamoilodeacetylocefalosporyna C
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
OCH
3
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
OCH
3
7-a-metoksycefalosporyna C
N
O
NH
S
COOH
OH
R
OCH
3
karbamoilofosforan
N
O
NH
S
COOH
O
R
OCH
3
O
OCH
3
OH
O
H
OH
cefamycyna C
cefamycyna B
OSO
3
H
C
H
3
O
H
OH
cefamycyna A
karbamoilofosforan
CEFAMYCYNA C
N
O
NH
O
N
H
2
COOH
S
CH
2
OH
COOH
deacetylocefalosporyna C
cefalosporyna C
S
CH
3
CH
2
CoA
R
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
O-karbamoilodeacetylocefalosporyna C
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
NH
2
O
R
OCH
3
O
2
S-adenozylometionina
N
O
NH
S
COOH
O
CH
3
O
R
OCH
3
7-a-metoksycefalosporyna C
N
O
NH
S
COOH
OH
R
OCH
3
karbamoilofosforan
N
O
NH
S
COOH
O
R
OCH
3
O
OCH
3
OH
O
H
OH
cefamycyna C
cefamycyna B
OSO
3
H
C
H
3
O
H
OH
cefamycyna A
karbamoilofosforan
OTRZYMYWANIE KWASU 7-AC Z
CEFALOSPORYNY C
OTRZYMYWANIE KWASU 7-ADC
Z KWASU 7-AC
N
S
O
COO
H
R
3
O
H
2
N
CH
3
O
N
S
O
COO
H
R
3
CH
3
H
2
N
H
2
/Ni(Ra)
KWAS 7-AMINO-
CEFALOSPORANOWY(7-AC)
KWAS 7-AMINO-3-DEACETOKSY-
CEFALOSPORANOWY (7-ADC)
SYNTEZA KWASU 7-ADC
N
S
O
COOH
O
N
CH
3
O
O
S
H
CEFALOTYNA
(antybiotyk injekcyjny I generacji )
kw. octowy
pirydyna
N
S
O
COO
N
N
O
S
H
CEFALORYDYNA
MODYFIKACJA CEFALOSPORYN W POZYCJI 3
N
S
N
CH
3
CH
3
COOH
O
O
H
N
S
CH
3
CH
3
COOSi(CH
3
)
3
O
a. CH
3
COOH
b. BSA lub BSU
N
S
CH
2
CH
3
COOSi(CH
3
)
3
O
H
N
S
OH
COOSi(CH
3
)
3
CH
3
CH
3
C
O
N
S
O
COOH
CH
3
N
O
H
KWAS 7-FENYLOACETYLO-
3-DEACETOKSYCEFALOSPORANOWY
ksylen
TosOH
∆
(CH
3
CO)
2
O
DMF,
130oC
N
H
Br
∆
BSA- N,N-bis(trimetylsilyl)acetamid
BSU - N,N'-bis(trimetylsililo)mocznik
WYTWARZANIE KWASU 7-
FENYLOACETYLO-ADC Z PENICYLINY G
D
O
OCH
CH
3
N
N
N
N
S
H
N
COONa
O
S
N
O
N
S
O
COOh
H
2
N
O
CH
3
O
OH
COOH
D
HCOOH
Ac
2
O
O
COOH
O
CH
D
SOCl
2
O
COCl
O
CH
D
N
N
N
N
CH
3
S
H
2
N
COOH
O
S
N
+
BSA(
SPRAWDZIæ
STRUKTURE ZE STR 164)
N
N
N
N
CH
3
S
N
COOSi(CH
3
)
3
O
S
N
(CH
3
)
3
SI
H
CEFAMANDOL NAFAT
SYNTEZA CEFAMANDOLU
Z KWASU 7-AC I KWASU MIGDAŁOWEGO
N
S
O
COOCH
3
CH
3
H
2
N
NH
COOH
O
O
C(CH
3
)
3
+
C
NH
O
O
(CH
3
)
3
C
O
N
CH
3
COOCH
3
O
S
N
H
C
NH
O
O
(CH
3
)
3
C
O
N
CH
3
COOH
O
S
N
H
C
NH
2
O
N
CH
3
COOH
O
S
N
H
CEFALEKSYNA
(antybiotyk injekcyjny I generacji )
Synteza cefaleksyny
O
O
N
O
CH
3
COOK
CH
3
S
N
H
CH
3
COOCH
2
CCL
3
CH
3
S
N
ClCOOCH
2
CCl
3
-CO
2
CH
3
COOCH
2
CCL
3
CH
3
S
N
O
COOOH
Cl
(CH
3
CO)
2
O
DMF
O
H
N
S
CH
2
CH
3
Cl
3
CCH
2
O
O
H
S
N
CH
3
O
O
OCH
2
CCl
3
O
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
N
O
C
6
H
5
H
O
PCl
5
pirydyna
benzen
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
N
O
C
6
H
5
Cl
CH
3
OH
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
N
O
C
6
H
5
OCH
3
H
2
O
N
S
COOCH
2
CCl
3
CH
3
O
H
2
N
C
6
H
5
COOH
NCOOC(CH
3
)
3
H
D
C
6
H
5
N
H
C
N
O
CH
3
COOCH
2
CCl
3
S
N
O
H
OC(CH
3
)
3
O
C
6
H
5
NH
3
N
O
CH
3
COO
S
N
O
H
CEFALEKSYNA
odblokowanie
Synteza cefaleksyny z penicyliny V
-
schłodzenie do +10
o
C
-zakwaszenie do pH 5,5 (kwas octowy)
-dodatek ziemi okrzemkowej
B
ę
bnowy filtr pró
ż
niowy
H2O
Grzybnia odpadowa
filtrat
1.zakwaszenie do pH 2,8 do 3,0 (kationit);
2.ogrzewanie w 37
o
C –
nast
ę
puje rozkład
penicyliny N;
3. schłodzenia do 0
o
C
Kolumna z anionitem silnie
zasadowym (eliminacja anionów)
Kolumna z anionitem słabo zasa-
dowym (elucja cefalosporyny C)
Elucja kwasem octowym i pirydyn
ą
(pH 5,0 – 5,5, temp. 0
o
C)
eluat
1. Zat
ęż
anie;
2. wytr
ą
canie bezw. acetonem
3. Filtracja;
4.suszenie pod zmniejszonym
Surowa cefalosporyna C
Rozpuszczenie w wodzie
Neutralizacja rozc. NaOH
Kolumna z kationitem (usuwanie pirydyny)
1.
Zat
ęż
anie (pró
ż
nia)
2. Krystalizacja
3. Wirowanie
4. Przemywanie etanolem, suszenie
Sól sodowa
cefalosporyny C
Schemat wyodr
ę
bmniania i oczyszczania
cefalosporyny C
Zawiesina
pofiltracyjna
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
edema biotech materialy id 1501 Nieznany
Biotechnologia egzamin id 89038 Nieznany
biotech opracowanie 1 id 89010 Nieznany
bol biotech materialy id 74968 Nieznany (2)
biotech pytania id 89008 Nieznany (2)
biotechnologia roslin1 id 89111 Nieznany (2)
Biotechnologia Wyklady id 89130 Nieznany (2)
edema biotech materialy id 1501 Nieznany
Biotechnologia egzamin id 89038 Nieznany
k biotechnologia id 229589 Nieznany
biotechnologia zad 01 id 89134 Nieznany (2)
PODSTAWY BIOTECHNOLOGII id 3668 Nieznany
Elementy 160 gram id 177920 Nieznany
Biotechnologia id 89023 Nieznany
Biotechnologia i inzyniera id 8 Nieznany (2)
Abolicja podatkowa id 50334 Nieznany (2)
4 LIDER MENEDZER id 37733 Nieznany (2)
katechezy MB id 233498 Nieznany
więcej podobnych podstron