Aktywność enzymatyczna

Zadanie 1

Materiały:

Wyciąg z ziemniaków, 0,1 M bufor fosforanowy (pH=7,4), 0.3% r-r pirokatechiny

Wykonanie:

1. Do 4 ponumerowanych probówek dodać po 3 ml wyciągu z ziemniaka. Próbkę nr 3

wstawić na 5 min. do wrzącej łaźni wodnej, a następnie oziębić do temperatury
pokojowej. Następnie do wszystkich probówek odmierzyć podane w tabeli poniżej
ilości buforu fosforanowego i roztworu pirokatechiny lub wody.

2. Zawartość wszystkich probówek zmieszać, zanotować czas i pozostawić w

temperaturze pokojowej. Co kilka minut probówki nr 1-3 mocno wstrząsnąć dla
lepszego dostępu powietrza. Próbę nr 4 pozostawić bez wstrząsania (ograniczenie
dostępu tlenu). Wyniki odczytać i umieścić w tabeli po 30 min.

Numer próby

Wyciąg z

ziemniaka (ml)

Woda (ml)

Bufor

fosforanowy

(ml)

Pirokatechina

(ml)

Wynik

1

3

0

0,5

1

2

3

1

0,5

0

3

3

0

0,5

1

4

3

0

0,5

1

3. Wyjaśnij otrzymane wyniki według następujących punktów:
a. Wskaż substrat reakcji. Jaką rolę w doświadczeniu odgrywa wyciąg z ziemniaka?
b. Wynik próby nr 1-komentarz
c. W jakim celu wykonujemy pozostałe próby?

Zadanie 2
Próba benzydynowa

Materiały:
Wyciąg z ziemniaków, odczynnik benzydynowy

Wykonanie:

1. Do 1 ml wyciągu z ziemniaków dodać kilka kropel świeżo przygotowanego

odczynnika benzydynowego. Niebieska barwa wskazuje peroksydazy.

2. Powtórzyć próbę na wyciągu ziemniaka uprzednio zagotowanym i oziębionym.
3. Wyjaśnij ewentualne różnice w obu barwach.

Zadanie 3

β

-amylaza z nasion zbożowych

Materiały:
Wyciąg z nasion, płyn Lugola, 0,5% r-r skrobi, odczynnik Benedicta

Wykonanie:
1. Do 6 ponumerowanych probówek odmierzyć po 0,7 ml wody i 1 ml r-ru skrobi.
2. Do probówki nr 1 dodać 0,3 ml zagotowanego i oziębionego wyciągu z nasion, do

pozostałych po 0,3 ml niezagotowanego wyciągu z nasion, wymieszać. Zanotować
czas. Probówkę nr 2 nie inkubować (patrz tabelka), tylko od razu wstawić do wrzącej
łaźni wodnej na ok 5 minut w celu przerwania reakcji. Pozostałe probówki wstawić do
łaźni o temp. 37ºC na czas podany w tabelce.

3. Po czasie podanym w tabelce wyjmować kolejne probówki i dokładnie zagotować we

wrzącej łaźni wodnej (ok 5 minut). Oziębić, zawartość każdej z probówek podzielić na
2 części; w jednej przeprowadzić próbę Benedicta, natomiast w drugiej próbę Lugola.

4. Wyniki wpisać do poniższej tabeli oraz skomentować według pytań.

Numer próby Czas inkubacji (min) Próba Benedicta Próba Lugola

1

30

2

0

3

5

4

10

5

20

6

30

1. Wskaż substrat reakcji.
2. W jakim celu wykonane są próby Benedicta i Lugola. Odnieś to do swoich wyników.

Odnotuj zmianę w czasie.

3. Która próba jest próbą kontrolną i dlaczego?

Zadanie 4
Inwertaza z drożdży

Materiały:
R-r inwertazy, bufor octanowy (pH=4.4), r-r skrobi, r-r sacharozy, odczynnik Benedicta

Wykonanie:
1. Do 4 ponumerowanych probówek odmierzyć podane w tabeli ilości enzymu, wody,

buforu octanowego, r-ru skrobi, r-ru sacharozy.

2. W probówce nr 4 r-r enzymu zagotować przed dodaniem pozostałych składników

.

3. Próby inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 min.
4. Po tym czasie zawartość probówek zobojętniać r-rem węglanu sodu (wobec papierka

lakmusowego) i wykonać próbę Benedicta.

Nume

r

próby

Enzym

(ml)

Woda

(ml)

Bufor

(ml)

Skrobia

(ml)

Sacharoza

(ml)

Próba

Benedicta

1

1

1

1

0

0

2

1

0

1

1

0

3

1

0

1

0

1

4

1

0

1

0

1

Wypełnij tabelę i po zapoznaniu się z właściwościami enzymu (biblioteka) omów
otrzymane wyniki i celowość użycia poszczególnych składników mieszaniny reakcyjnej.

Zadanie 5
Enzymatyczna hydroliza skrobi przez α-amylazę śliny

Materiały:
1% roztwór skrobi, odczynnik Benedicta, ślina, płyn Lugola.

Wykonanie:

1. Do dwóch probówek dodać 3 ml roztworu skrobi i 1 ml śliny, zamieszać. Po 10

minutach wykonać próbę Benedicta oraz Lugola.

2. Powtórzyć doświadczenie używając śliny uprzednio zagotowanej.