Zadanie 1
β-amylaza z nasion zbożowych
Materiały:
Wyciąg z nasion, płyn Lugola, 0,5% r-r skrobi, odczynnik Benedicta Wykonanie:
1. Do 6 ponumerowanych probówek odmierzyć po 0,7 ml wody i 1 ml r-ru skrobi.
2. Do probówki nr 1 dodać 0,3 ml zagotowanego i oziębionego wyciągu z nasion, do pozostałych po 0,3 ml niezagotowanego wyciągu z nasion, wymieszać. Zanotować czas. Probówki nr 2 nie inkubować (patrz tabelka), tylko od razu wstawić do wrzącej łaźni wodnej na ok 5 minut w celu przerwania reakcji. Pozostałe probówki wstawić do łaźni o temp. 37ºC na czas podany w tabelce.
3. Po czasie podanym w tabelce wyjmować kolejne probówki i od razu dokładnie zagotować we wrzącej łaźni wodnej (ok 5 minut). Oziębić, zawartość każdej z probówek podzielić na 2 równe części; w jednej przeprowadzić próbę Benedicta, natomiast w drugiej próbę Lugola.
4. Wyniki wpisać do poniższej tabeli oraz skomentować według pytań.
Numer próby
Czas inkubacji
Próba
Próba Lugola
(min)
Benedicta
1
60
2
0
3
10
4
20
5
40
6
60
1. Wskaż substrat reakcji.
2. W jakim celu wykonane są próby Benedicta i Lugola? Odnieś to do swoich wyników.
Odnotuj zmianę w czasie.
3. Która próba jest próbą kontrolną i dlaczego?
Zadanie 2
Próba benzydynowa
Materiały:
Wyciąg z ziemniaków, odczynnik benzydynowy
Wykonanie:
1. Do 1 ml wyciągu z ziemniaków dodać kilka kropel świeżo przygotowanego odczynnika benzydynowego. Niebieska barwa wskazuje peroksydazy.
2. Powtórzyć próbę na wyciągu ziemniaka uprzednio zagotowanym i oziębionym.
3. Wyjaśnij ewentualne różnice w obu barwach.
Materiały:
Wyciąg z ziemniaków, 0,1 M bufor fosforanowy (pH=7,4), 0.3% r-r pirokatechiny Wykonanie:
1. Do 4 ponumerowanych probówek dodać po 3 ml wyciągu z ziemniaka. Próbkę nr 3 wstawić na 5 min. do wrzącej łaźni wodnej, a następnie oziębić do temperatury pokojowej. Następnie do wszystkich probówek odmierzyć podane w tabeli poniżej ilości buforu fosforanowego i roztworu pirokatechiny lub wody.
2. Zawartość wszystkich probówek zmieszać, zanotować czas i pozostawić w temperaturze pokojowej. Co kilka minut probówki nr 1-3 mocno wstrząsnąć dla lepszego dostępu powietrza. Próbę nr 4 pozostawić bez wstrząsania (ograniczenie dostępu tlenu). Wyniki odczytać i umieścić w tabeli po 30 min.
Wyciąg
Bufor
Pirokatechina
Numer próby z ziemniaka
Woda (ml)
fosforanowy
Wynik
(ml)
(ml)
(ml)
1
3
0
0,5
1
2
3
1
0,5
0
3
3
0
0,5
1
4
3
0
0,5
1
3. Wyjaśnij otrzymane wyniki według następujących punktów: a. Wskaż substrat reakcji. Jaką rolę w doświadczeniu odgrywa wyciąg z ziemniaka?
b. Wynik próby nr 1-komentarz.
c. W jakim celu wykonujemy pozostałe próby?
Zadanie 4
Inwertaza z drożdży
Materiały:
R-r inwertazy, bufor octanowy (pH=4.4), r-r skrobi, r-r sacharozy, odczynnik Benedicta Wykonanie:
1. Do 4 ponumerowanych probówek odmierzyć podane w tabeli ilości enzymu, wody, buforu octanowego, r-ru skrobi, r-ru sacharozy.
2. W probówce nr 4 r-r enzymu zagotować przed dodaniem pozostałych składników .
3. Próby inkubować w temperaturze pokojowej przez 30 min.
4. Po tym czasie zawartość probówek zobojętniać r-rem węglanu sodu (wobec papierka lakmusowego) i wykonać próbę Benedicta.
Numer
Enzym
Woda (ml) Bufor (ml)
Skrobia
Sacharoza
Próba
próby
(ml)
(ml)
(ml)
Benedicta
1
1
1
1
0
0
2
1
0
1
1
0
3
1
0
1
0
1
4
1
0
1
0
1
Wypełnij tabelę i po zapoznaniu się z właściwościami enzymu (biblioteka) omów otrzymane wyniki i celowość użycia poszczególnych składników mieszaniny reakcyjnej.
Zadanie 5
Enzymatyczna hydroliza skrobi przez α-amylazę śliny
Materiały:
1% roztwór skrobi, odczynnik Benedicta, ślina, płyn Lugola.
Wykonanie:
1. Do dwóch probówek dodać 3 ml roztworu skrobi i 1 ml śliny, zamieszać. Po 10
minutach wykonać próbę Benedicta oraz Lugola.
2. Powtórzyć doświadczenie używając śliny uprzednio zagotowanej.