Oznaczenie antygenów układu ABO
" Oznaczenie grupy krwi u noworodka wykonuje się metodą probówkową używając dwu serii
surowic wzorcowych lub odpowiednich odczynników monoklonalnych.
" Nie wykonuje się badań w kierunku oznaczenia regularnych przeciwciał układu AB0.
" przygotować i opisać cztery probówki:
 probówka nr 1, 2, 3  oznaczenie antygenów układu AB0
 probówka nr 4  kontrola z surowicą własną lub surowicą grupy AB
" do probówek dodać po dwie krople:
" surowicy wzorcowej anty-A do probówki nr 1
" surowicy wzorcowej anty-B do probówki nr 2
" surowicy wzorcowej anty-A+B do probówki nr 3
" surowicy dziecka lub grupy AB do probówki nr 4
" do wszystkich probówek dodać po dwie krople krwinek dziecka
" inkubacja 15 min. w temperaturze pokojowej
" po inkubacji wirować 1 min. z prędkością 150 g (około 1000 obr./min.)
" reakcję odczytać poprzez delikatne wstrząsanie poszczególnymi probówkami
" wynik zapisać w formie protokołu
SCHEMAT OZNACZENIA ANTYGENÓW UKA
ADU AB0 U NOWORODKÓW
krwinki noworodka
4
1 2 3
surowice wzorcowe surowica noworodka
lub surowica grupy AB
anty- A + B
anty-B
anty-A
ZAKRES BADAC
IMMUNOHEMATOLOGICZNYCH
U KOBIET W CI
ŻY l PO PORODZIE (Schemat 1)
W CI
ŻY PO PORODZIE
DO 12 TYGODNIA 28-30 TYDZIEC

U WSZYSTKICH U WSZYSTKICH U KOBIET Rh- U KOBIET Rh+
KOBIET KOBIET
AB0 Rh(D) ALLOPRZECIWCIAA
A ALLOPRZECIWCIAA
A
ODPORNOÅšCIOWE ODPORNOÅšCIOWE
ALLOPRZECIWCIAA
A ALLOPRZECIWCIAA
A DO PODANIA GDY DZIECKO
ODPORNOÅšCIOWE ODPORNOÅšCIOWE Ig ANTY Rh(D) WYMAGA LECZENIA
KRWI

NIEOBECNE
OBECNE
IDENTYFIKACJA ALLOPRZECIWCIAA
DIAGNOSTYKA CHOROBY
DIAGNOSTYKA WEWN
TRZMACICZNA HEMOLITYCZNEJ NOWORODKA
Próba zgodności serologicznej
" Przed każdym przetoczeniem krwi
wykonuje się próbę zgodności
serologicznej, która obejmuje:
 Kontrolę antygenów układu AB0 biorcy i
dawcy
 KontrolÄ™ antygenu D u biorcy (kontrolÄ™
antygenu D u dawcy o ile biorca jest D-
ujemny)
 Wykonanie próby zgodności surowicy biorcy z
krwinkami dawcy w teście LEN i PTA-LISS
 Przeprowadzenie badań w kierunku obecności
alloprzeciwciał odpornościowych w surowicy
biorcy w teście LEN i PTA-LISS
 Weryfikacja wyników badań przy łóżku
chorego z zastosowaniem  karty do szybkiej
kontroli grupy krwi lub odczynników
monoklonalnych do oznaczania grup krwi
układu AB0 produkcji Bioscot Ltd.
Układ ABO Układ Rh
RHD i RHCE na krótkim
Ramię długie
Geny ramieniu chromosomu
chromosomu 9
1 (1p34-36)
H/h, A, B, 0, allele
Allele RhD, RhC/c, RhE/e
sekrecji Se/se
Liczba antygenów 4 49
Enzymy-
glikozylotransferazy
Produkty genów (fukozy, N- Dwa polipeptydy
acetylogalaktozaminy,
galaktozy)
Na komórkach 
glikoproteiny,
Polipeptydy wiążące
glikolipidy, w osoczu
Budowa antygenów się z białkami szkieletu
glikosfingolipidy,
erytrocyta
w wydzielinach
glikoproteiny
Nierozpuszczalne na
erytrocytach i innych
komórkach oraz
Występowanie Wyłącznie na
rozpuszczalne u tzw.
antygenów erytrocytach
wydzielaczy w płynach
ustrojowych (poza
OUN i pł. m-rdz.)
Naturalne regularne
Odpornościowe
kompletne nie
Alloprzeciwciała przechodzące przez
przechodzÄ…ce przez
łożysko
łożysko
Klasa IgM IgG1
Pośredni test antyglobulinowy (PTA-PEG)
" przygotować i opisać sześć probówek:
 probówka nr 1, 2, 3  wykrywanie alloprzeciwciał odpornościowych
 probówka nr 4  autokontrola
 probówka nr 5  kontrola dodatnia
 probówka nr 6  kontrola ujemna
" dodać po dwie krople
 surowicy badanej do probówki nr 1, 2, 3, 4
 standardu anty-D do probówki nr 5 i 6
" następnie dodać po dwie krople 4% zawiesiny w roztworze PBS
 krwinek badanych do probówki nr 4
 krwinek wzorcowych grupy 0 Rh+ CCDee (1) do probówki nr 1 i 5
 krwinek wzorcowych grupy 0 Rh+ ccDEE (2) do probówki nr 2
 krwinek wzorcowych grupy 0 Rh- ccddee K (3) do probówki nr 3 i 6
" do wszystkich probówek dodać po cztery krople odczynnika PEG (glikol polietylenowy)
" inkubacja 20 min. w temperaturze 37ºC
" zawartość probówek przemyć trzykrotnie dużą ilością roztworu PBS
" po ostatnim płukaniu nadmiar PBS odsączyć na ligninie
" do wszystkich probówek dodać po dwie krople surowicy anty-globulinowej monoswoistej anty-IgG
" zawartość probówek dokładnie wymieszać przez wstrząsanie
" wirować 30 sek. z prędkością 150g (około 1000 obr./min.)
" reakcję odczytać makroskopowo poprzez delikatne wstrząsanie poszczególnymi probówkami
" wyniki badań zapisać w formie protokołu
SCHEMAT WYKONANIA BADANIA
krwinki wzorcowe
krwinki wzorcowe
krwinki
0+CCDee 0+ccDEE 0-ccddee 0 Rh+ 0 Rh-
badane
1 2 3 4 5 6
surowica badana standard anty-D
PEG
Wzór protokołu
Numer Metoda Krwinki wzorcowe Kontrola Kontrola
Autokontrola
badania badania CCDee ccDEE ccddee K dodatnia ujemna
Bezpośredni test antyglobulinowy (BTA)
Zawiesiny krwinek
" 4% zawiesina krwinek badanych w roztworze PBS uprzednio 3 x przepłukanych dużą
ilością PBS
" 4% zawiesina krwinek wzorcowych grupy 0 Rh+ i 0 Rh- w roztworze PBS uczulonych
przeciwciałami anty0D uprzednio 3 x przepłukanych dużą ilością PBS
Metoda probówkowa
" przygotować i opisać cztery probówek:
 probówka nr 1  próbka badana
 probówka nr 2  autokontrola
 probówka nr 3  kontrola dodatnia
 probówka nr 4  kontrola ujemna
" dodać po dwie krople 4% zawiesiny w roztworze PBS
 krwinek badanych do probówki nr 1 i 2
 krwinek wzorcowych uczulonych grupy 0 Rh+ do probówki nr 3
 krwinek wzorcowych uczulonych grupy 0 Rh- do probówki nr 4
" krwinki wirować 3 min. z prędkością 340-680 g (około 1500-2000 obr./min.)
" nadmiar PBS odsączyć na ligninie
" dodać po dwie krople
 surowicy antyglobulinowej do probówki nr 1, 3 i 4
 roztworu PBS do probówki nr 2
" zawartość probówek dokładnie wymieszać przez wstrząsanie
" wirować 30 sek. z prędkością 150g (około 1000 obr./min.)
" reakcję odczytać makroskopowo poprzez delikatne wstrząsanie poszczególnymi
probówkami
" wyniki badań zapisać w formie protokołu
SCHEMAT WYKONANIA BADANIA
krwinki noworodka krwinki uczulone
0 Rh+ 0 Rh-
1 2
3 4
surowica PBS
antyglobulinowa
surowica antyglobulinowa
mono lub poliwalentna
mono lub poliwalentna
Wzór protokołu
Numer badania Próbka badana Autokontrola Kontrola dodatnia Kontrola ujemna
Wykluczanie ojcostwa w układzie AB0 i Rh
Matka A2B CcddEE
Dziecko A2 CCDEe
Ojciec I B ccDEE
Ojciec II A2 CcDEe
Ojciec III A1B ccddee
Wykluczanie ojcostwa w układzie AB0 i Rh
Matka A1 ccddEe
Dziecko A1B CcddEe
Ojciec I B ccDEe
Ojciec II A1B Ccddee
Ojciec III 0 CcDEe
 (0) (3) +/- (5) +
(8) ++ (10) +++ (12) ++++
Ryc. 1. Aglutynacja i stopień jej nasilenia
Score O - brak aglutynacji, jednolita zawiesina krwinek
Score 3 +/- drobne aglutynaty na tle jednolitej zawiesiny krwinek
Score 5 + liczne drobne aglutynaty
Score 8 ++ średniej wielkości zlepy
Score 10 +++ kilka dużych zlepów krwinek
Score 12 ++++ aglutynacja kompletna, jeden duży zlep krwinek
Grupy krwi układu ABO
Surowice wzorcowe Krwinki wzorcowe
Anty- A1
Grupa
anty-A anty-B anty-A+B 0 A1 B
(dolichotest)
- - - - + + / 0
+ - + - - + + A1
- + + - + - / B
+ + + - - - + A1B
+ - + - - + - A2
+ + + - - - - A2B
- + - + + - A2 anty-A1
+
+ + + - + - - A2B anty-A1