MateriaÅ‚y do ćwiczeÅ„ Ochrona Åšrodowiska CYTOMETR PRZEPAYWOWY WÅ‚aÅ›ciwoÅ›ci FSC i SSC Detektor rozproszenia pod kÄ…tem 90 stopni Detektor rozproszenia na wprost Laser Rozproszenie na wprost FSC " mierzone wzdÅ‚uż osi padajÄ…cego Å›wiatÅ‚a lasera " okreÅ›la wielkość komórki Rozproszenie boczne SSC " mierzona pod kÄ…tem 90° w stosunku do wiÄ…zki laserowej " Å›wiatÅ‚o laserowe odbite i rozproszone " okreÅ›la gÄ™stość i liczbÄ™ ziarnistoÅ›ci 2 FSC SSC J A K R O Z P O Z N A Ć L I M F O C Y T Y ? T17 B Tc Treg Th np. FITC CD4+ CD3+ CD4+ CD3+ PE CD3+ CD3-4- FL-1 (CD4) CD4+ CD3+ CD3+CD4+ to limfocyty Th CD3+ to w wiÄ™kszoÅ›ci limfocyty Tc CD3-CD4- limfocyty B FL-2 (CD3) CYKL KOMÓRKOWY M G2 G0 G1 G0 / G1 S G2 / M S 0 200 400 600 800 1000 4N 2N zawartość DNA Count Wykres dwuwymiarowy - kropkowy, gÄ™stoÅ›ci (każda kropka reprezentuje pojedynczÄ… komórkÄ™) - analizuje intensywność fluorescencji dwóch parametrów Metody oznaczania apoptozy i nekrozy: Aneksyna-FITC (fluorosceina) + jodek propidyny Aneksyna - FITC Å‚Ä…czy siÄ™ z fosfatydyloserynÄ… obecnÄ… na zewnÄ…trz bÅ‚ony komórek apoptotycznych - apoptoza Jodek propidyny (PI) nie przenika przez nie uszkodzonÄ… bÅ‚onÄ™ komórek żywych i wczesno apoptotycznych - barwi na czerwono komórek nekrotycznych oraz pózno apoptotycznych Pózna apoptoza nekroza http://www.chem.pg.gda.pl/Katedry/Leki_Biochemia/dydaktyka/kultury_tkankowe/morfologia_komorki_apoptotycznej.pdf apoptoza http://www.ujk.edu.pl/ibiol/ZRI/hodowla_tkankowa_wojcik_05.pdf