Patofizjologia
chorób
infekcyjnych
Nagrody Nobla w dziedzinie medycyny
związane z badaniami chorób
zakaźnych
• 1976 B.S. Blumberg (wirusowe
zapalenie wątroby typu B); C.
Gajdusek (kuru)
• 2005 B.J. Marshall & J.R. Warren –
Helicobacter pylori – rola w
zapaleniu i chorobie wrzodowej
żołądka
• „NOWE”???
• Powrót kiły do Europy w XV-XVI w. (i ospa
prawdziwa w Ameryce) i obecnie,
• Helicobacter pylori
• AIDS (z Afryki)
• Ebola (jak dotychczas tylko w Afryce…)
• SARS (jak dotychczas głownie Daleki
Wschód…)
• Ptasia grypa (H5N1 itd. Itp….)
• Warianty lekooporne…
Mutacje wirusów odzwierzęcych?
PRZYKŁADY „nowych chorób
zakaźnych”
Streptococcus pneumoniae
Staphylococcus aureus
Czynniki infekcyjne
•Bakterie
•Wirusy
• Pierwotniaki
• Grzyby
• Mykoplazmy
• Pasożyty
wielokomórkowe
Kliniczny przebieg infekcji zależy
od:
• Miejsca (narządu, tkanki) ulegającego
infekcji
• Właściwości biologicznych mikroorganizmu
• Sposobu i nasilenia reakcji (zapalnych,
odpornościowych, alergicznych)
organizmu na obecność mikroorganizmu
Właściwości biologiczne
mikroorganizmów mające znaczenie w
patomechanizmie infekcji
• Tropizmy
lub ich brak (rozwój uogólniony lub ograniczony do
określonej tkanki, narządu)
• Preferowane środowisko rozwoju
• pozakomórkowe,
• wewnątrzkomórkowe (może utrudniać reakcje odpornościowe i leczenie)
• Produkcja
toksyn
i ich mechanizmy działania
• egzotoksyny – wydzielane lub obecne na powierzchni mikroorganizmu
• endotoksyny – uwalniane przy rozpadzie
• pirogeny (LPS)
• enzymy (np. kolagenaza)
• Immunogenność
• Zdolność do stymulacji swoistej odpowiedzi immunologicznej i jej
wielkość
• Produkcja „superantygenów”
• Alergizacja
• Zdolność do modyfikacji genomu organizmu zakażonego
• Wirusy
• Bakterie ?
• Pasożyty ?(choroba Chagasa)
Niektóre mechanizmy działania toksyn
bakteryjnych
Toksyny bakteryjne modulują czynność
komórek
• Toksyny
uszkadzające komórki
(hemolizyny, leukocydyny) ODCZYN
ZAPALNY
• Toksyny
modulujące metabolizm
komórek, np. :
•Toksyny
podwyższające poziom cAMP
(np. toksyna
cholery
) BIEGUNKA
• Toksyny
blokujące syntezę białek
(np.
toksyna błonicza)
• Toksyny
blokujące przewodnictwo
nerwowe
(toksyna botulinowa,
tężcowa)
BAKTERIE MOGĄ PRODUKOWAĆ
MIESZANINĘ TOKSYN O ZŁOŻONYM
DZIAŁANIU
PRZYKŁAD:
Jak toksyna cholery (i inne)
wywołują biegunkę?
Cholera – podstawy
patogenezy
• Vibrio cholerae kolonizuje błonę śluzową jelita
cienkiego
• 1000 bakterii wystarczy aby wywołać chorobę
• Toksyna cholery zaburza transport jonów i H
2
O w
nabłonku jelitowym
• Obfita, wodnista biegunka i wymioty 35-
60 godzin po infekcji
• Gwałtowne odwodnienie, zaburzenia elektrolitowe
i kwasica – o ile niewyrównane ŚMIERĆ
Akwaporyny umożliwiają przejście wody przez błony
komórek
nabłonka w jelicie:
H
2
O
H
2
O
Bakteryjne toksyny A-B
• Składają się z podjednostek A i B
(np. toksyna cholery i błonicza)
• Podjednostka A posiada
aktywność toksyczną (często
enzymatyczną); wchodzi do
komórki i wywiera efekt
• Podjednostka B zawiera domenę
receptorową rozpoznającą
właściwy typ komórki
eukariotycznej; może tworzyć kanał
w błonie komórkowej pozwalający
na wniknięcie podjednostki A
A
2
B
|
S
S
|
|
S
S
|
A
1
|
S
H
|
S
H
|
S
H
|
S
H
Działanie toksyny cholery - 1
• Podjednostka B (
receptor
)
wiąże błonowy
gangliozyd
(GM1) w enterocytach
• Podjednostka A zostaje
wbudowana w błonę
komórki
• Wiązanie dwusiarczkowe
pomiędzy A1-A2 ulega
redukcji uwolnienie i
aktywacja A1
• A1 (
aktywna toksyna
)
dyfunduje w błonie
komórkowej aż dotrze do
białka Gs
Receptory sprzężone z białkami G:
największa rodzina receptorów
• G
s
stymuluje cyklazę adenylanową (AC)
• G
i
hamuje cyklazę adenylanową
• Gq stymuluje fosfolipazę C
• G
t
transducyna (aktywuje PDE wiążąc inhibitor)
• G
o
otwiera/zamyka kanały jonowe
Białka G amplifikują sygnały (1R=10G)
i zmieniają czas odpowiedzi
13
Klasy białek G
• Błonowe białko Gs reguluje aktywność cyklazy
adenylanowej , a przez to produkcję cAMP z ATP
• Cykliczny AMP jest głównym „drugim
przekaźnikiem” sygnału od receptorów hormonów,
cytokin, neuromediatorów itp. Do wnętrza komórki.
• Błonowe białko Gs (42 kDa) jest obiektem
działania toksyny
• Podjednostka A1 toksyny wykazuje zdolność do
ADP-rybozylacji
białek Gs
Działanie toksyny cholery - 2
Nikotynamid
Nikotynamid
ADP-ryboza
+ Białko docelowe
(aktywne)
Białko docelowe
ADP-rybozylowane białko
NIEAKTYWNE
NAD
ADP - rybozylacja
Mechanizm działania toksyny cholery
w enterocytach
•Stymulacja receptora
•Aktywacja białka G
•Powstanie formy Gs-GTP
•Aktywacja cyklazy
adenylanowej
•Produkcja cAMP reakcja
fizjologiczna
(ulega wygaszeniu przez
aktywność GTPazy Gs)
Toksyna cholery dokonuje ADP-
rybozylacji Gs
Zablokowanie aktywności
GTPazy
Nadprodukcja cAMP
• nadmierna aktywność PKA
• fosforylacja białek błonowych
(inaktywacja kanałów
jonowych,
akwaporyn)
• spadek przepuszczalności
jonów i
H
2
O do komórki
BIEGUNKA
Gs
Transport wody przez nabłonek
jelitowy jest znoszony przez toksynę
cholery w wyniku zablokowania
akwaporyn
Zdrowie
Cholera
H
2
O
H
2
O
H
2
O
H
2
O
X
X
X X X X
Inne toksyny bakteryjne powodujące
ADP-rybozylację białek
• Egzotoksyna A (Pseudomonas aeruginosa) Ef-2 (zaburzenia
syntezy białek
śmierć komórek)
• Egzoenzym S (P. aeruginosa) białka z rodziny ras (zaburzenia
transdukcji sygnału
śmierć komórek)
• Termowrażliwa enterotoksyna E. coli białka Gs (
biegunki
)
• Toksyna krztuśca Bordetella pertussis hamuje białko Gi wzrost
aktywności cyklazy adenylanowej w komórkach nabłonka oskrzeli,
egzotoksyna B. pertussis wykazuje aktywność cyklazy adenylanowej
• Toksyna botulinowa C3 Clostridium botulinum białka G w
neuronach cholinergicznych zablokowanie sekrecji ACh
• Toksyna C2 z C. botulinum aktyna zahamowanie
polimeryzacji zaburzenia ruchu komórek
Escherichia coli
Toksyna błonicza - 1
• Dawka śmiertelna:
100 ng/kg ciężaru
ciała
• Hamuje syntezę
białek we wrażliwych
komórkach; wywiera
efekt lokalny
(martwica komórek
nabłonka
oddechowego) i
układowy
(zapalny)
• Receptor toksyny jest
formą naskórkowego
czynnika wzrostu (HB-
EGF – heparin-binding
EGF-like growth factor)
Domena
katalityczna
Domena
przezbłonowa
Domena
Wiążąca
receptor
Miejsce
proteolizy
Wiązanie
dwusiarczkowe
C. diphtheriae
Transport we krwi
H
+
H
+
S
S
SH
NAD
N
ADPR
EF
2
EF
2
EF2 = czynnik
wydłużania 2
NAD = dwunukleotyd
nikotynamido-adenylowy
= NADPR
N = Nikotynamid
ADPR = ADP-ryboza
Toksyna
błonicza
Receptor EGF na
komórce
docelowej
Toksyna błonicza - działanie
HB-EGF
Neurotoksyny
bakteryjne: ten sam
mechanizm – różne
skutki
Bakteryjne neurotoksyny –1
• Toksyna botulinowa i tężcowa
to ENZYMY - endopeptydazy
cynkowe
• Toksyna botulinowa
(Clostridium botulinum) - 1
gram mógłby zabić milion
ludzi
• Niszczy synaptobrewinę
w
neuronach obwodowych
– Zahamowanie uwalniania
acetylocholiny
PORAŻENIE
WIOTKIE
• Toksyna tężcowa (Clostridium
tetani)
• Niszczy synaptobrewinę
w
neuronach OUN
– Zahamowanie uwalniania
neuromediatorów
hamujących (glicyna, GABA)
PORAŻENIE
SPASTYCZNE
PORAŻENIE
WIOTKIE
PORAŻENIE
SPASTYCZNE
Bakteryjne neurotoksyny –
dlaczego działąją różnie?
• Toksyna tężcowa jest
transportowana do
neuronów OUN przez
wsteczny transport
aksonalny
i działa w
synapsach GABA-ergicznych
(„hamowanie hamowania”)
• Toksyna botulinowa
nie jest
transportowana
i działa w
złączach nerwowo-
mięśniowych
C
N
S
S
150 kDa
C
N
S
S
100 kDa
N
C
binding
pore
Zn binding 50 kDa
Wąglik - odzwierzęce narzędzie
terorystów?
Działanie toksyny wąglika (Bacillus
anthracis)
Postać skórna wąglika
Toksyna wąglika:
„czynnik obrzękowy”
jest cyklazą adenylanową
(powoduje
powstanie nadmiaru cAMP
zaburzenia
transportu H
2
O i jonów przez błony
komórkowe;
„czynnik letalny” jest
metaloproteinazą, niszczy MAPKK –
3 zabijając komórki
„antygen ochronny” blokuje
działanie
układu dopełniacza, wiąże się do
receptorów na powierzchni komórek
ułatwiając
endocytozę
pozostałych
toksyn
Postać płucna wąglika (48 godzin)
• Martwica węzłów
chłonnych w
śródpiersiu
• Zapalenie i obrzęk
płuc
•Zapalenie opłucnej
•Niewydolność
oddechowa
•Śmierć
Sposób i nasilenie reakcji
organizmu na obecność
mikroorganizmu wpływa na
obraz kliniczny infekcji!!!!!
+
_
Odpowiedź organizmu przeciwdziałająca
infekcji bakteryjnej należy do klinicznego
obrazu infekcji
• Nieswoista
– Bariery tkankowe:
• Skóra (naskórek)
• Błony śluzowe
– Śluz
– Lizozym
– Niskie pH
– Fagocytoza i „wybuch tlenowy”
• Granulocyty obojętnochłonne
• Monocyty / makrofagi
– Aktywność układu dopełniacza
uszkodzenie komórek
ZAPALENIE
– Inne zjawiska należące do obrazu procesu zapalnego
• Produkcja cytokin prozapalnych
– Ogólnoustrojowe objawy zapalenia
• Swoista
– Aktywacja limfocytów Th2 cytokiny
– Produkcja przeciwciał
Możliwe reakcje alergiczne
+
_
Ostre zapalenie jako podstawowy
sposób odpowiedzi organizmu na
infekcję
• Infekcja bakteryjna
• Działanie toksyczne
produktów bakterii–
uszkodzenie i śmierć
(nekroza) komórek
• LPS i inne pirogeny
egzogenne
• Rozpad bakterii w wyniku
reakcji obronnych
organizmu
• Infekcja wirusowa
• Rozpad komórek
zainfekowanych w wyniku
cyklu litycznego wirusów
• Rozpad komórek
zainfekowanych w wyniku
reakcji obronnych
organizmu
Systemowe objawy ostrego
zapalenia w konsekwencji infekcji
• Gorączka (wzrost ciepłoty ciała)
– Pirogeny egzogenne (lipopolisacharyd otoczkowy –
LPS)
– Pirogeny endogenne: IL-1, TNF-alfa, IL-6
• Leukocytoza
– Neutrofilia
(infekcja bakteryjna)
– Limfocytoza
(infekcja wirusowa)
– Eozynofilia
(infestacja pasożytnicza, alergie –
także na
bakterie)
• Odpowiedź „ostrej fazy”
– Wysoki poziom białke ostrej fazy (CRP) w surowicy
– Nasilony odczyn opadania erytrocytów (OB)
+
_
Bakterie rezydentne przewodu
pokarmowego - 1
• Całkowita masa – około 1 kg
• Zróżnicowanie – około 100 gatunków
rozpoznanych, N nierozpoznanych
• Rola fizjologiczna
• Udział w metabolizmie substratów
pokarmowych, ułatwianie trawienia wstępnego
• Produkcja do 100x więcej różnych rodzajów
białek niż wątroba
• Ochrona przed infekcją przez patogeny
zewnątrzpochodne
• Probiotyczna stymulacja GALT
Bakterie rezydentne przewodu
pokarmowego - 2
• Stany patologiczne związane (?) z
zaburzeniami równowagi pomiedzy
mikroflorą jelitową (microbiota) a GALT
• Uszkodzenie ściany jelita
– zwiększona przepuszczalność
• Przewlekła choroba zapalna (ch.
Leśniowskiego – Crohna
• Nowotwory przewodu pokarmowego
• Cukrzyca typu I
• Niewydolność wątroby
• Przewlekła niedomoga serca
Bakterie a nowotwory przewodu
pokarmowego – indukcja przewlekłego
procesu zapalnego i/lub mutacji
• Helicobacter pylori
jest obecny w treści
żołądkowo-jelitowej osób chorych na raka żołądka i
uważany za jego czynnik etiologiczny (karcynogen
I klasy).
• Błona śluzowa osób chorych na raka lub gruczolaka
okrężnicy jest w ponad 90% skolonizowana przez
Esherichia coli
.
• Listeria monocytogenes
wydziela
metaloproteazę, która ułatwia tworzenie
przerzutów przez raka okrężnicy.
Helicobacter pylori – nagroda
Nobla 2005
Press Release: The 2005 Nobel Prize in Physiology or Medicine
3 October 2005
The Nobel Assembly at Karolinska Institutet
has today
decided to award
The Nobel Prize in Physiology or Medicine for 2005
jointly to
Barry J. Marshall and J. Robin Warren
for their discovery of
"the bacterium Helicobacter pylori and its role in
gastritis and peptic ulcer disease"
Helicobacter pylori – dynamika infekcji
Helicobacter pylori – udział w
kancerogenezie
Bakterie rezydentne przewodu
pokarmowego - 3
• Patomechanizm przewlekłej niedomogi
serca na tle dysregulacji flory jelitowej:
– Rozrost bakterii (rezydentnych i/lub
pochodzenia zewnętrznego) uszkodzenie
ściany jelita (endotoksyny, enzymy)
uwalnianie endotoksyn do krwiobiegu
stymulacja procesu zapalnego sekrecja
cytokin prozapalnych efekt
kardiosupresyjny niewydolność
Materiał genetyczny
mikroorganizmów w naszym
genomie?!
• Obecność przejściowa (do litycznego
zniszczenia komórki zainfekowanej) –
wirusy (DNA, RNA) – np. HPV, adenowirusy
itp….)
• Stabilna integracja kompletnego genomu
wirusowego do genomu (bez zniszczenia
komórki) – rzadko (HIV) ale…
• Trwała integracja fragmentów retrowirusów
– częsta!
KONIEC