Iwona Czaplicka



Niskocząsteczkowe białka

pośredniczące w przekazywaniu

sygnałów między komórkami,



Produkowane przez wszystkie tkanki,

prawie wszystkie komórki,



Indukowana ekspresja,



Działanie:

•

Autokrynowe

•

Parakrynowe

•

Endokrynowe,



Cytokiny indukują podziały,

różnicowanie komórek, chemotaksję,

aktywację, aktywność cytotoksyczną,

regulują intensywność i czas trwania

odpowiedzi immunologicznej,



kontrolują dojrzewanie komórek

układu odpornościowego,



Odgrywają kluczową rolę podczas

odpowiedzi immunologicznej oraz

podczas naprawy tkanek.



Plejotropowość -

zdolność do

wielokierunkowego działania,



Redundancja -

różne cytokiny wpływają

jednakowo na daną populację komórek,



Synergizm -

wzmacniający wpływ

działania kilku cytokin na dane
zjawisko,



Antagonizm –

przeciwstawne działanie

dwóch lub więcej cytokin.

METODY

MATERIAŁ



Test hamowania migracji

makrofagów i leukocytów

wielojądrzastych (

MIT

) –

wykazuje aktywność

cytokiny

MIF

(Macrophage Migration

Inhibitory Factor),



MIF -

małe białko,

stymulujące wytwarzanie

przez makrofagi

czynników indukujących

rozwój stanu zapalnego.



Homogenat komórek
śledziony myszy,



Podłoże podstawowe
oraz podłoże zawierające
aktywator –

ConA

, w

różnych stężeniach,



Komory inkubacyjne.



Mikroskop projekcyjny i
planimetr.

http://www.pathguy.com/sol/46474.jp
g

Inkubacja w wilgotnej atmosferze przez 18h w temp.
37

o

C.

Odczytanie wyników za pomocą mikroskopu
projekcyjnego.



Pola migracji mierzy się za pomocą

planimetru.



Wynik testu to indeks migracji (IM):

<0,8 – hamowanie migracji,
>1,2 – stymulacja migracji

WNIOSEK:

Im większe stężenie ConA, tym większa

produkcja cytokin ( w tym MIF) i mniejsze pole

migracji makrofagów.

kontrolnym

podlozu

w

migracji

pole

Średnie

ConA

z

podlou

w

migracji

pole

Średnie



Wykrywanie możliwe na różnych

poziomach,



Ocena ekspresji genów – Real Time PCR,



Wykrywanie wewnątrzkomórkowych

cytokin – cytometria przepływowa,



Wykrywanie cytokin wydzielanych na

zewnątrz komórki:

•

ELISA

•

ELISPOT

•

RIA – test radioimmunologiczny



Cytokiny w płynach tkankowych:

•

Western blot

•

Testy immunologiczne – wykorzystujące
przeciwciała monoklonalne,

•

Testy biologiczne – wykrywanie biologicznej
aktywności cytokin, linie komórkowe będące
bioindykatorami obecności cytokin.



Jest to niezwykle istotne w
diagnostyce klinicznej (stany zapalne,
stany patofizjologiczne powodowane
przez cytokiny).



Wprowadza się też podawanie
cytokin jako metody leczniczej np.
wirusowe zapalenie wątroby typu C.



Lydyard, Whelan, Fanger, Krótkie Wykłady
Immunologia, PWN 2008.