Metody

Metody

barwieni

barwieni

a

a

preparat

preparat

ów

ów

Metody barwienia

Metody barwienia

preparatów

preparatów



celem barwienia jest wykazanie obecności

celem barwienia jest wykazanie obecności

bakterii w badanym preparacie, obejrzenie

bakterii w badanym preparacie, obejrzenie

układu przestrzennego, morfologii i anatomii

układu przestrzennego, morfologii i anatomii

komórek

komórek



zwykle, ogląda się bakterie martwe gdyż giną

zwykle, ogląda się bakterie martwe gdyż giną

one w procesie utrwalania

one w procesie utrwalania



barwniki dzielimy na kwaśne (eozyna, fuksyna

barwniki dzielimy na kwaśne (eozyna, fuksyna

kwaśna) i zasadowe (błękit metylenowy,

kwaśna) i zasadowe (błękit metylenowy,

fuksyna zasadowa, czerwień obojętna, fiolet

fuksyna zasadowa, czerwień obojętna, fiolet

krystaliczny)

krystaliczny)



żywe bakterie oglada się rzadko, w ciemnym

żywe bakterie oglada się rzadko, w ciemnym

polu widzenia, w kropli wiszącej, mikroskopie

polu widzenia, w kropli wiszącej, mikroskopie

kontrastowo-fazowym

kontrastowo-fazowym

Metody barwienia

Metody barwienia

preparatów

preparatów



podział:

podział:



proste (jeden barwnik)

proste (jeden barwnik)

- pozytywne

- pozytywne

- negatywne (tusz chiński, nigrozyna)

- negatywne (tusz chiński, nigrozyna)



złożone (więcej barwników)

złożone (więcej barwników)

- pozytywne

- pozytywne

- pozytywno-negatywne (uwidacznia otoczki,

- pozytywno-negatywne (uwidacznia otoczki,

fuksyna karbolowa, T-70

fuksyna karbolowa, T-70

º

º

C , + nigrozyna)

C , + nigrozyna)

Metody barwienia

Metody barwienia

preparatów

preparatów



przygotowanie preparatu

przygotowanie preparatu

- pobrać jedną kolonię ezą, rozetrzeć

- pobrać jedną kolonię ezą, rozetrzeć

na szkiełku

na szkiełku

- połączyć z kroplą 0,9% NaCl

- połączyć z kroplą 0,9% NaCl

- pozostawić do wyschnięcia

- pozostawić do wyschnięcia

- utrwalić w płomieniu palnika

- utrwalić w płomieniu palnika

Metody barwienia

Metody barwienia

preparatów

preparatów



Metoda L

Metoda L

ö

ö

fflera

fflera

- na utrwalony preparat nalać błekit

- na utrwalony preparat nalać błekit

metylenowy

metylenowy

- po 2 min. spłukać wodą

- po 2 min. spłukać wodą

- komórki zabarwione jednolicie na

- komórki zabarwione jednolicie na

niebiesko

niebiesko

Metody barwienia

Metody barwienia

preparatów

preparatów



metoda Gramma

metoda Gramma

- na utrwalony preparat nalać fiolet krystaliczny

- na utrwalony preparat nalać fiolet krystaliczny

- po 2-3 min. spłukać wodą

- po 2-3 min. spłukać wodą

- nalać płyn Lugola

- nalać płyn Lugola

- po 1-2 min. spłukać wodą

- po 1-2 min. spłukać wodą

- nakroplać odbarwiacz (etanol) aż do czasu

- nakroplać odbarwiacz (etanol) aż do czasu

spływania czystego odbarwiacza

spływania czystego odbarwiacza

- spłukać wodą

- spłukać wodą

- nalać fuksynę zasadową

- nalać fuksynę zasadową

- po 30 sek. spłukać wodą

- po 30 sek. spłukać wodą

- suszyć w temperaturze pokojowej, najlepiej w pozycji

- suszyć w temperaturze pokojowej, najlepiej w pozycji

pionowej

pionowej

- bakterie Gram-dodatnie sa fioletowe, a Gram-ujemne

- bakterie Gram-dodatnie sa fioletowe, a Gram-ujemne

czerwone

czerwone

Metody barwienia

Metody barwienia

preparatów

preparatów



Metoda Ziehla-Neelsena

Metoda Ziehla-Neelsena

- na utrwalony preparat nalać fuksynę karbolową

- na utrwalony preparat nalać fuksynę karbolową

- trzykrotnie podgrzać do pojawienia sie pary

- trzykrotnie podgrzać do pojawienia sie pary

- spłukać wodą

- spłukać wodą

- nakraplać odbarwiaczem (kwaśny alkohol) aż

- nakraplać odbarwiaczem (kwaśny alkohol) aż

do czasu spływania czystego odbarwiacza

do czasu spływania czystego odbarwiacza

- nalać błekit metylenowy

- nalać błekit metylenowy

- po 1-2 min. spłukać wodą

- po 1-2 min. spłukać wodą

- wysuszyć preparat

- wysuszyć preparat

- czerwono zabarwione – bakterie kwasooporne

- czerwono zabarwione – bakterie kwasooporne

(prątki),

(prątki),

niebiesko - pozostałe składniki preparatu

niebiesko - pozostałe składniki preparatu

Metody barwienia

Metody barwienia

preparatów

preparatów



Metoda Weysona

Metoda Weysona

- na utrwalony preparat nalać odczynnik

- na utrwalony preparat nalać odczynnik

Weysona (fiolet krystaliczny+błekit

Weysona (fiolet krystaliczny+błekit

metylenowy)

metylenowy)

- po 2 min. spłukać wodą, osuszyć

- po 2 min. spłukać wodą, osuszyć

- komórki bakterii ciemnogranatowe, inne

- komórki bakterii ciemnogranatowe, inne

elementy preparatu jasnofioletowo-

elementy preparatu jasnofioletowo-

granatowe

granatowe