Rodzaje matryc

rozdzielających

wykorzystywanych w

elektroforezie

Nośnik w elektroforezie

• stabilizuje elektrolit
• przyczynia sie do lepszej separacji makrocząsteczek.

Szczególnie zastosowanie porowatych nośników
(agarowa, poliakrylamid) potęguje efekt separacji
poprzez dodatkowe frakcjonowanie makrocząsteczek
na zasadzie sita molekularnego.

Przy poszukiwaniu nowego rodzaju nośnika należy
zawsze pamiętać, że powinien on być elektrycznie
obojętny.

Nośniki

Nośnikami mogą być różne substancje, jak:
• Bibuła
• Żel krzemionkowy
• Żel dekstranowy
• Żel agarowy
• Żel skrobiowy
• Żel agarozowy
• Syntetyczny żel poliakrylamidowy

Agaroza

Jest to obojętna frakcja polisacharydowa
izolowaną z agaru.

Przygotowanie żelu jest bardzo proste i polega na
rozpuszczeniu na gorąco agarozy w buforze
używanym do elektroforezy (roztwory 0,5 – 2 %) a
następnie wylaniu ochłodzonego do temp. 500C
roztworu na płytki szklane

Żel
poliakryloamid
owy

Tworzony jest on przez
polimeryzację monomerów
akryloamidowych w długie łańcuchy,
które następnie są łączone
kowalencyjnie przez N,N’-metyleno-
bisakrylamid. Proces ten trwa około
20 minut i zachodzi w obecności
siarczanu amonu i
tetrametyloetylenodiaminy.

Żel poliakryloamidowy
charakteryzuje się bardzo wysoką
czułością (rzędu pg) oraz
rozdzielczością (do 1 pary zasad w
przypadku DNA i RNA). Jednak
akryloamidy używane do jego
przygotowania są wysoce
neurotoksyczne.