W-7 Ochrona Środowiska

Mikrobiologia

Sprawozdanie z ćw. 9 - 10

Temat: Analiza mikrobiologiczna gleby.

1. Gleba - to powierzchniowa warstwa litosfery ziemskiej, utworzona z wietrzejącej skały, przekształconej w specyficzny sposób przez organizmy żywe. Gleba jest złożonym utworem umożliwiającym funkcjonowanie ekosystemów glebowych. W skład gleby wchodzą cząstki stałe mineralne i organiczne, powietrze i roztwór glebowy oraz bytujące w niej organizmy żywe - edafon. Proporcje poszczególnych składników w glebie utrzymują się mniej więcej na tym samym poziomie właściwym dla danej gleby.

2. Ze względu na rozmiar organizmy żyjące w glebie można zaliczyć do trzech grup:

- Mikrobiota (niedostrzegalne gołym okiem) - wirusy, bakterie, grzyby, pierwotniaki, glony

- Mezobiota (0,2-2 mm) - wazonkowce, nicienie, ślimaki, owady bezskrzydłe, wije, roztocza i inne, małe rośliny,

- Makrobiota (>2 mm) - dżdżownice, krety, gryzonie np. myszy polne, większe owady, korzenie dużych roślin i drzew.

1. Rola bakterii i grzybów:

- Są współtwórcami struktury gleby – tworzą próchnicę - najważniejszy koloid glebowy, wpływający w zasadniczy sposób na jej strukturę, właściwości sorpcyjne, zasobność w składniki organiczne.

- Wpływają w decydujący sposób na powstawanie gruzełkowatej, gąbczastej struktury gleby przez wytwarzanie śluzów otoczkowych oraz, w przypadku bakterii nitkowatych i grzybów, przez formę swego wzrostu.

1. Podział mikroflory glebowej ze względu na pochodzenie:

- Mikroflora autochtoniczna - mikroflorę gleby dzieli się na autochtoniczną i zymogeniczną.

- Mikroflora zymogeniczna - Drobnoustroje zymogeniczne wprowadzane są do gleb okresowo.

5) Analizę gleby stosuje się do oceny:

- metod unieszkodliwiania odpadków miejskich,

- jakości osadów ściekowych, odpadów i nawozów wykorzystywanych do celów rolniczych,

- stanu sanitarnego gleby przy planowaniu i budowie osiedli mieszkaniowych, żłobków przedszkoli, obiektów dla służby zdrowia i przemysłu spożywczego oraz rekreacyjnych, jak również do oceny stanu sanitarnego gleby na cele rolnicze.

Ponadto uzyskane wyniki mogą być przydatne do wyjaśnienia dróg zakażenia i określenia czasu przeżywalności mikroorganizmów chorobotwórczych w glebie. Są one również istotne z punktu widzenia możliwości zakażenia poprzez glebę wód gruntowych i powierzchniowych.

Zadanie 1. Badanie „ogólnej” liczby bakterii saprofitycznych, przetrwalnikujących oraz termofilnych.

Wykonanie: Badanie wykonano metodą płytkową Kocha, stosując posiew wgłębny próbek na podłoże agarowe odżywcze. Do posiewu użyto po 1 cm³ zawiesiny przygotowanych rozcieńczeń gleb.

Po okresie inkubacji policzono ilość wyrosłych kolonii. Do obliczenia liczby kolonii wybrano płytki, na których wyrosło 30-300 kolonii. Dla określenia ogólnej liczby bakterii płytki inkubowano w 280C przez 48±2 h natomiast dla ustalenia liczby przetrwalników inkubowano w 550C przez 24±2 h.

Obserwacje:

	Bakterie saprofityczne	Bakterie przetrwalnikowe	%
Gleba	52*10^6	11,6*10^6	22,3%
	149*10^6	24,5*10^6	16,4%
Kompost	10,4*10^6	0,064*10^6	0,6%

Wnioski: Kompost był aktywny metabolicznie. Najliczniej zasiedlona była gleba nr. 2.

Zadanie 2. Wykrywanie bakterii grupy coli i bakterii coli typu kałowego (Escherichia coli).

Wykonanie: Bakterie wykrywa się metodą fermentacyjną probówkową, opartą na zdolności tych bakterii do fermentowania laktozy z wytworzeniem w podłożu kwasu oraz widocznego gazu. Badanie wstępne - polega na posiewie (wprowadzeniu) odpowiednich objętości roztworu glebowego do podłoża płynnego Kesslera-Swenartona i inkubacji w temperaturze 37 OC przez 24-48 h. Następnie obserwowano zaszłe zmiany. Określono NPL i MIANO Coli.

Obserwacje:

	10^0	10^1	10^2	10^3	10^4	10^5
Gleba 1	+	+	+	+	+	-	NPL= 62
	+	+	+	+	-	-	Miano = 2
Gleba 2	+	+	+	+	+	-	NPL= 23*10^5
	+	+	+	+	+	-	Miano = 4/10^4
Kompost	+	+	+	+	-	-	NPL=23*10000
	+	+	+	+	-	-	Miano = 4*10/10^4

• najbardziej prawdopodobna liczba bakterii grupy coli (NPL) – liczba bakterii grupy coli w 100 cm3 badanej próbki wody lub ścieków określona (z tablic) na podstawie rachunku prawdopodobieństwa;

• miano coli – najmniejsza objętość badanej wody lub ścieków, wyrażona w cm3, w której stwierdza się jeszcze obecność bakterii grupy coli;

Zadanie 5. Wykrywanie żywych jaj robaków jelitowych i określenie stadium ich rozwoju.

Obserwacja przez mikroskop preparatów: glisty ludzkiej, glisty psiej/ kociej, włosogłówki.

- Glista ludzka ( Ascaris suum) – jaja

Występuje w jelicie cienkim.

- Glista kocia (Toxocara codi) – jaja

Występuje w jelicie cienkim.

- Włosogłówki ( Trichuris) – jaja

Występuje w jelicie grubym.