metody analizy apoptozy bazujące na fragmentacji DNA	Elektroforeza DNA	- charakterystyczny, drabinkowy, obraz DNA kom. apoptotycznej
	Test kometowy	- elektroforeza indywidualnych komórek apoptotycznych - głowa – DNA niepofragmentowane - ogon – DNA pofragmentowane
	Metoda TUNEL	Przyłączenie do końca 3’OH nukleotydu BdDiPY-dUTP połączonego z fluoresceiną, katalizowane przez terminalną dezoksynukleotydową transferazę TdT. Detekcja wybarwionych fluorescencyjnie pęknięć DNA możliwa jest w mikroskopie fluorescencyjnym lub w cytometrze przepływowym.
	Mikroskop świetlny	Używając: fluoresceiny + dUTP, terminalnej dezoksynukleotydowej transferazy TdT, substratu dla ATP i anty-fluoresceinowych przeciwciał skonjugowanych z alkaliczną fosfatazą A
cytometryczne metody analizy apoptozy	Jodek propidyny + enzymy	- jodek propidyny przyłącza się do DNA (czerwona fluorescencja) - nie wybarwia komórek populacji sub-G1
	Analiza zmian w potencjale mitochondrialnym	- rodamina 123 (Rh123) i DioC6 – zmiana intensywności zielonej fluorescencji - JC-1 – zmiana fluorescencji z czerwonej na zieloną
	Zmiany w lokalizacji fosfatydyloseryny	- wyznakowanie fosfatydyloseryny aneksyną V - w komórkach apoptotycznych fosfatydyloseryna znajduje się po zewnętrznej stronie błony
próby ciążowe	Próba Aschheima i Zondeka	U samic myszy nastrzykiwanych moczem lub surowicą z hCG pojawiają się ciałka żółte a u niedojrzałych szczurów dochodzi do zmian rujowych w pochwie
	Próba Friedmana	U niedojrzałych królików lub trzymanych w odosobnieniu starych królików, którym podawano dożylnie mocz zawierający hCG, wywołano zmiany w macicy i powstanie świeżych ciałek żółtych
	Próba Gall i Mainini	U samic żab (Rana esculenta, Bufo bufo) nastrzykiwanych moczem z hCG wywołano owulację a u samców uwalnianie plemników i jader do kloaki
Histochemiczna metoda lokalizacji acetylocholinesterazy (AChE)	Metoda tiocholinowa i żelazicyjankowa wg. Tago i wsp.	Reakcję przeprowadza się na skrawkach kriostatowych 10-20 mikrometrów utrwalonych i prefundowanych lub skrawkach świeżych. Metoda Karnovsky’ego i Rootsa: jodek acetylotiocholiny (JATCh) przeprowadzany jest w tiocholinę przez AChE a następnie w Cu2Fe(OH)6 – produkt pierwotny, drobnoziarnisty, brązowy (brąz Hatchetta) Modyfikacja Tago: Cu2Fe(OH)6 w obecności H2O2 utlenia DAB który polimeryzuje i powoduje powstanie brunatnego produktu wtórnego. Produkt wtórny i pierwotny nierozpuszczalne w ksylenie i alkoholu.
Ocena żywotności/proliferacji komórek	Ocena integralności błony komórkowej	Ocena aktywności enzymów komórkowych uwalnianych do medium: test LDH, dehydrogenazy priogronianowej, dehydrogenazy glutaminianowej, aminotransferazy asparaginianowej
		Test wychwytu i gromadzenia barwników: błękit trypanu, czerwień obojętna
	Ocena aktywności metabolicznej komórek	Redukcja soli tetrazolowej do formazanu
		Test AlamarBlue: podczas proliferacji komórek pozywka zawierająca utlenioną niebieską formę AlamarBlue lega redukcji do formy czerwonej na skutek wzrostu stosunku NADP/NADPH
Perfuzja	Stosowana w celu: wypłukania krwi z narządów, utrwalenia ich, wykonania krioprotekcji lub odlewów naczyń	Po odsłonięciu serca oraz nacięciu lewej komory wprowadza się do aorty wstępującej kaniulę, mocuje się za pomocą zacisków. Następnie nacina się prawy przedsionek w celu umożliwienia wypływu krwi i podania płynów perfuzyjnych
Techniki mrożeniowe Krojenie skrawków: - mikrotom mrożeniowy (10-15 μm) - kriostat (4-10 μm)	Konwencjonalne gwałtowne zamrażanie	Tkanki przepojone krioprotektantem (20-30% glicerol, 15-30% sacharoza, 10% DMSO) zamrażane są w gazach: ciekły azot (-196^oC), mieszanina ciekłego i stałego azotu (-208^oC), freon 22 (-40^oC), freon 12 (-30^oC), ciekły izopropanol (-42^oC), hel (-89^oC)
	Ultraszybkie zamrażanie	Zamrażanie przez zatapianie: kriogen w pojemniku (ciekły propan lub etan)
		Zamrażanie przez rozpylanie: małe fragmenty tkanek (zawiesiny komórkowe, organella, membrany)
		Zamrażanie w strumieniu gazu: ciekły gaz wyrzucany z dyszy na próbkę
		Zamrażanie przez uderzanie: materiał umieszczony w uchwycie uderza o płytkę miedzianą ochłodzoną w ciekłym helu
	Zamrażanie pod wysokim ciśnieniem	Pozwala na obniżenie tempa ochładzania tkanki
Radioimmunologiczne metody oznaczania stężeń hormonów steroidowych	RIA	Metoda oparta na współzawodnictwie znakowanych (gorących) i nieznakowanych (zimnych) form tego samego steroidu o ograniczoną ilość miejsc wiązania na cząsteczkach swoistych przeciwciał. Pomiędzy ilością zimnego steroidu a steroidu gorącego istnieje zależność odwrotnie proporcjonalna .
Metody wykrywania promieniowania jonizującego	scyntylacyjna (luminescencyjna)	Swiecenie pewnych substancji chemicznych pod wpływem napromieniowania
	fotograficzna	Zaczernienie światłoczułej emisji na kliszy pod wpływem promieniowania jonizującego
	chemiczna	Niektóre substancje zmieniają zabarwienie pod wpływem promieniowania
	jonizacyjna	Pomiar stopnia jonizacji atomów substancji będących pod działaniem promieniowania jonizacyjnego
Testy aktywności cytotoksycznej	NR (Neutral Red)	Czerwień obojętna przechodzi przez błonę komórkową komórek żywych i gromadzi się w lizosomach
	Błękit trypanu	Barwi wyłącznie komórki martwe
	Test LDH	Metoda ta oparta jest na reakcjach enzymatycznych w wyniku których powstaje barwny produkt, oznaczany spektrofotometrycznie przy użyciu czytnika ELSA. Dehydrogenaza mleczanowa (LDH) jest enzymem cytozolowym, który w warunkach fizjologicznych nie jest uwalniany do środowiska. Uszkodzenie mechaniczne błony plazmatycznej oraz śmierć komórki powoduje uwolnienie LDH z komórek do środowiska
	Test z SRB	Sulforodamina B (SRB) to barwnik anionowy, który wiąże się z białkami wiązaniami elektrostatycznymi. Utrwalony barwnik SRB zostaje zmierzony fotometrycznie po rozpuszczeniu i koreluje z współczynnikiem całkowitej syntezy białek, a tym samym z proliferacją komórek.
	Test NAG	Pozwala na wykrycie N-acetylo-beta-D-glukozaminidazy enzymu lizosomalnego, który w przypadkach uszkodzenia komórki przechodzi do podłoża hodowlanego
	Test MTT	Wykorzystuje się w nim aktywność dehydrogenazy bursztynianowej - enzymu mitochondrialnego obecnego w żywych komórkach, który redukuje rozpuszczalny w wodzie bromek tetrazoliowy do formazanu, wytrącającego się w podłożu, w postaci nierozpuszczalnych, szaro-fioletowych kryształów. Intensywność zabarwienia roztworu po rozpuszczeniu kryształów, mierzona spektrofotometrycznie, jest miarą żywotności komórek
	Test BRdU	Służy do ilościowego pomiaru syntezy DNA
Techniki immunocytochemiczne	PAP (peroksydaza – antyperoksydaza)	- przeciwciało I skierowane mysie - przeciwciało II antymysie - surowica zawierająca przeciwciało przeciwko PAP - wykazanie obecności peroksydazy przez zastosowanie: DAB + H2O2 brązowy produkt reakcji KARBAZOL + H2O2 czerwony produkt reakcji (rozpuszczalny w alkoholu i ksylenie)
	APAAP (fosfataza alkaliczna – antyfosfataza alkaliczna)	- zasada taka sama jak w PAP - substraty dla APAAP: Fast Red i fuksyna zasadowa (czerwony produkt reakcji)
	ABC (Avidin-Biotin-immunoperoxidase Complex)	- przeciwciało I skierowane przeciwko wykrywanemu antygenowi -  przeciwciało II sprzężone z awidyną, skierowane przeciwko przeciwciału I -  enzym związany z biotyną, który łączy się z przeciwciałem II dzięki oddziaływaniu biotyny z awidyną Należy zablokować miejsca nieswoiście wiążące się z przeciwciałem za pomocą surowicy normalnej (pozyskanej ze zwierzęcia nieimmunizowanego).
Ekstrakcja całkowitego DNA	- m. fenolo-chloroformowa - m. solna - m. z wykorzystaniem substancji cha latujących CHELEX-100 - m. z zastosowaniem kulek magnetycznych - z wykorzystaniem miniklumn ze złożami krzemionkowymi, metoda QUIAGEN
Metabolizm estrogenów	EROD	Pomiar aktywności enzymów cytochromu P450 polegający na określeniu zdolności do przekształcania ethoxyrezurfiny (EROD) i pentoxyrezurfiny (PROD) w rezufrinę , która jest wyrywana w reakcji fluorescencyjnej.
	PROD
Oznaczanie aktywności aromatazy	Metoda fluorescencyjna	Pomiar ilości metabolitu (fluoresceiny) powstałego w reakcji aromatazy z dibenzofluoresceiną (DBF) w czytniku fluorescencyjnym (dł. fali wzbudzenia 485 nm, dł. fali emisji 538 nm)
	Test EIA (metoda immunoenzymatyczna)	Konwersja adrostendionu/testosteronu do estronu/estradiolu
Metody badania oddziaływania niegenomowego	- badanie aktywności kinaz MAPK, IP3, AKT, ERK1/2 - metody badania proliferacji z blokowaniem szlaków oddziaływania niegenomowego - metoda WestrnBlott - metody immunochistochemiczne
Metody badania cytotoksyczności	Trójparametrowy test do oceny cytotoksyczności (LDH-XTT-PAC) LDH – integralność błony komórkowej XTT- aktywność mitochondrialna PAC – metabolizm lizosomalny	Reakcje enzymatyczne w opisanej metodzie zachodzą w dwóch etapach: w pierwszym etapie mleczan przekształcany jest do pirogronianu, reakcję tę katalizuje LDH uwolniona z komórek, która przenosi H^+ z mleczanu na NAD^+. W drugim etapie diaforaza katalizuje przeniesienie H^+ z NADH/H^+ na tetrazolonę, która ulega redukcji do formazanu. Metoda ta pozwala w sposób prosty i jednoznaczny określić czy dana substancja powoduje uszkodzenie błony plazmatycznej komórek, a w konsekwencji ich śmierć.
		XTT: mitochondrialna dehydrogenaza bursztynianowa redukuje żółtą sól tetrazolową do pomarańczowego rozpuszczalnego formazanu w obecności odczynnika sprzęgającego elektrony
		PAC (kwaśna fosfataza) umieszczona jest w aparacie Golgiego i jest markerem aktywności lizosomalnej. Rozszczepia ona bezbarwny substrat p-nitrofenylofosforan do bezbarwnego p-nitrofenolu, który jest mierzony spektrofotometrycznie (dł.fali 450 nm)po konwersji do żółtej formy p-nitrofenolanu po dodaniu 1M NaOH.