Nie ma czystego DNA. Może być ono zanieczyszczone np. białakami
Spektrofotometryczna ocena DNA- absorbancja badanej próby dokonuje się przy długości fali 260 nm wobec próby ślepej, którą stanowi jałowa woda destylowana lub roztwór, w którym rozpuszczono wyizolowane DNA. Badane preparaty mogą być rozcieńczone H2O.
Pomiar ilości i określenie czystości DNA
Długość fali (absorbancja) | Substancje adsorbujące |
---|---|
230 | Polisacharydy, EDTA, etanol |
260 | DNA, RAN |
270 | Fenol |
280 | Białka |
320 | Drobiny komórkowe |
Ocena jakościowa DNA wyliczana jest ze stosunku absorbancji A260/A280 długości fali świetlnej ( 260 nm/280 nm)
A260/A280=1,8÷2,0→czyste DNA
Ocena jakościowa spektrofotometryczna DNA
- A260/A280==1,8÷2,0→czyste DNA
- A260/A280=2,2
- A320≈0,0
Ocena ilościowa spektrofotometryczna DNA
- zawartość DNA wyrażany w µg/ml
xµg/ml DNA=A260*50*R
R- rozcieńczenie DNA
50- stały współczynnik
Opis próbek- data, rozcieńczenie, substancja……