Biochemia

Sprawozdanie

Oznaczanie ilości białek w próbkach środowiskowych.

1. Cel ćwiczenia:

Celem ćwiczenia było zapoznanie z metodami oznaczania ilości białek w próbkach środowiskowych. Metoda Lowry’ego, którą wykorzystano opierała się na barwnej reakcji białek z odczynnikiem Folina-Ciocalteau.

2. Przebieg ćwiczenia:

Pierwszym krokiem było wykonanie odpowiednich rozcieńczeń mleka (rozcieńczenia 1:500 oraz 1:1000, oba wykonane podwójnie). Następnie do 5 probówek odmierzono po 0.4 ml próbki (2 x 1:500, 2 x 1:1000, próba ślepa – 0.4 ml wody destylowanej) oraz 2 ml roztworu A (roztwór zawierający po 0.5 ml 2% NaKC₄H₄O₆•4H₂O i 1% CuSO₄•5H₂O rozpuszczonych w 2% alkalicznym roztworze Na₂CO₃) i dobrze wymieszano. Próbki odstawiono na 10 minut.

Po tym czasie bardzo szybko dodano 0.2 ml odczynnika E i mieszano 5-7 sekund. Następnie probówki inkubowano w ciemnym miejscu przez czas 30 minut, po czym zmierzono absorbancję przy długości fali λ=750 nm.

3. Wyniki:

Lp.	Rozcieńczenie	Absorbancja	Stężenie białka [g/l]	Średnie stężenie białka:
1	1:500	0.191	27.01	28.65 [g/l]
2	1:500	0.214	30.86
3	1:1000	0.121	30.55	Odchylenie standardowe: 2.397
4	1:1000	0.108	26.19

Równanie krzywej wzorcowej:

y = 335.21x – 10.014 [mg/l]

R² = 0.985

4. Wnioski:

Do oznaczenia ilości białek użyto mleka „Łaciate” 0.5% tłuszczu. Wg etykietki na opakowaniu mleko zawierało 3,2 g białka w 100 ml produktu. Wykorzystując metodę Lowry’ego uzyskano wynik 2,865 g/100 ml. Zawartość białka nieznacznie odbiega od informacji na opakowaniu. Prawdopodobnie jest to spowodowane drobnymi błędami pomiarowymi, które mogą wynikać z samej reakcji z odczynnikiem Folina.
W skład odczynnika wchodzi kwas fosfomolibdenowy, który w środowisku zasadowym nie jest stabilny i może ulegać hydrolizie. Dlatego powodzenie naszego doświadczenia w dużej mierze zależało od intensywnego wytrząsania. Na skutek nieprawidłowego wymieszania reakcja zachodzi z mniejsza wydajnością, co zaburza warunki pomiaru. Istotny wpływ na wyniki mogła mieć tez przypadkowo zanieczyszczona próba ślepa