Sprawozdanie z ćwiczeń laboratoryjnych

Oznaczanie witaminy C metodą Tillmansa	10.12.2013r.

Wstęp teoretyczny:

Metoda Tillmansa oparta jest na redukcji barwnika 2,6-dichlorofenoloindofenolu przez kwas askorbinowy. W oznaczeniu wykorzystuje się właściwości redukcyjne kwasu askorbinowego. Kwas askorbinowy oznaczany jest przez miareczkowanie analizowanej próbki mianowanym roztworem 2,6-dichloro-fenoloindofenolem (DCIP) w środowisku kwaśnym (zapobiega to utlenieniu kwasu askorbinowego tlenem z powietrza oraz chroni przed działaniem oksydaz). Barwnik jest zarazem indykatorem, po wyczerpaniu się kwasu askorbinowego zabarwia on próbę miareczkowaną na kolor różowy. Jest to metoda prosta, ale tylko w przypadku roztworów bezbarwnych i niezawierających innych związków powodujących redukcję odczynnika Tillmansa.

Odczynniki i materiały:

Kwas siarkowy (25%), roztwór skrobi (1%), jodek potasu, roztwór 2,6-dichlorofenyloindofenolu (100mg%), Na₂S₂O₃ (0,002M), sok jabłkowy.

Przebieg wykonania doświadczenia:

• Do kolby stożkowej odmierzono 10ml pięciokrotnie rozcieńczonego barwnika-
  2,6-dichlorofenyloindofenolu (z roztworu podstawowego 100mg%)

• Dodano 100 mg jodku potasu (KJ) oraz 1 ml 25% H₂SO₄

• Odstawiono na 10 min w ciemne miejsce

• Następnie próbę miareczkowano 0,002 M tiosiarczanem sodu (Na₂S₂O₃)wobec skrobi

• Wykonano trzy powtórzenia

• Obliczono stężenie molowe barwnika

• Do kolby stożkowej na 200 ml odmierzono 31 ml soku jabłkowego i 31 ml wody destylowanejuzyskując dwukrotne rozcieńczenie roztworu

• Próbę miareczkowano roztworem barwnika o znanym stężeniu

• Wykonano trzy powtórzenia

• Obliczono stężenie procentowe witaminy C w soku jabłkowym.

Pomiary i obliczenia:

Do miareczkowania barwnika zużyto 2ml tiosiarczanu o stężeniu 0,002M.

Obliczono stężenie barwnika:

C_m = $\frac{2 0,002M 2\text{ml}}{10\text{ml}}$ = 0,0008M

Objętość barwnika zużyta do miareczkowania soku: 1,5ml.

Liczba moli barwnika jest równa liczbie moli witaminy C w roztworze soku.

0,0008mol_barwnika 1000ml

x₁mol 1,5ml

x₁ = 1,2·10^-6mol_barwnika
Sok zawiera 1,2·10^-6mol witaminy C

1mol­_wi.C 176g

1,2·10^-6mol_­­ x­­­₂

x_2­­ = 2,112·10^-4g
Wartość należy pomnożyć razy 2, ponieważ sok był dwukrotnie rozcieńczony

Zawartość witaminy C w soku wynosi 4,224·10^-4g.

4,224·10^-4g­­_wit.C 20ml_soku

x₃ 100ml_soku

x₃ = 2,112·10^-3g_wit.C 100ml soku zawiera ok. 21mg witaminy C.

Wnioski:

Otrzymana w wyniku pomiarów i obliczeń wartość jest zbliżona do wartości podawanych przez producentów soków na etykietach. Niewielkie różnice w zawartości witaminy C w soku mogą wynikać np. z różnic w procesie sterylizacji i zamykania opakowań, do którego stosuje się nadtlenek wodoru, który powoduje utlenianie kwasu askorbinowego. Na zmniejszanie się jego zawartości wpływa również obecność tlenu, a także temperatura. Należy wziąć również pod uwagę błędy pomiarowe.

Literatura:

1.Ćwiczenia z biochemii dla studentów Uniwersytetu Rolniczego. Red. Henryk Kołoczka. Kraków 2009.

2. Oznaczanie witaminy C w sokach i suplementach diety z wykorzystaniem HPLC. Anna Lebiedzińska, Jakub Czaja, Małgorzata Najmowicz.