Sprawozdanie�z komentarzy ostateczna wersja

Sprawozdanie z ćwiczenia 8-9

Temat: Analiza sanitarna wody (cz.1-2)

Biotechnologia I, Chem II

Skład sekcji:

Data ćwiczenia:

Cel ćwiczenia:

Jakościowa i ilościowa analiza wody z Kłodnicy pod względem żyjących w niej mikroorganizmów.

Materiał i metody:

Materiał pobrany do badań: próbka wody z rzeki Kłodnicy.

Metody oznaczeń mikroorganizmów:

Oznaczenie liczebności bakterii mezofilnych metodą posiewu wgłębnego: wykonano serię rozcieńczeń od 10^-1 do 10^-7. Z rozcieńczenia 10^-3 i 10^-4 na szalki Petriego naniesiono po 1ml materiału, a następnie zalano przestudzonym agarem odżywczym (ok. 10ml). Przygotowany materiał inkubowano w temperaturze 37^oC przez ok. 24h.
Oznaczenie liczebności bakterii psychrofilnych metodą posiewu wgłębnego: z wcześniej przygotowanych rozcieńczeń (z 10^-5 i 10^-6) pobrano po 1ml badanego materiału i naniesiono na płytki Petriego po czym zalano ok. 10ml ostudzonego agaru odżywczego i pozostawiono do zastygniecia. Próbki inkubowano w temperaturze pokojowej (ok. 20^oC) przez 72h.
oznaczenie miana i indeksu coli metoda probówkową: z uprzednio przygotowanych rozcieńczeń pobrano po 1ml zawiesiny i wysiano do probówek z podłożem Eijkmana zawierających rurki Durhama. Próbki inkubowano w temperaturze 37^oC przez 48h.

Badania potwierdzające obecność bakterii grupy coli i coli typu kałowego metodą posiewu redukcyjnego:

z prób dodatnich (10^-1,10^-2,10^-3) wybrano o najwyższym prawdopodobieństwie wystąpienia żądanej bakterii (10^-1,10^-2) i przy użyciu ezy mikrobiologicznej wykonano posiew systemem powierzchniowym sektorowym na płytki z podłożem Endo. Posiew inkubowano w temperaturze 37^oC przez weekend.
Zawiesinę bakterii z dodatniej hodowli w próbkach z podłożem Eijkmana (10^-1,10^-2) przeniesiono ezą mikrobiologiczną do probówek z pożywką z zielenią brylantową, następnie delikatnie wymieszano lekko wstrząsając. Inkubowano w temperaturze 44^oC przez ok. 3 dni.

Wyniki:

Zestawienie liczby kolonii i liczebności bakterii mezo- i psychrofilnych na 1 ml wody badanej, z uwzględnieniem rozcieńczenia:

Obliczamy ilość mikroorganizmów:

Liczebność mikroorganizmów w 1cm³= a x b , gdzie

mikroorganizmy	mezofilne	psychrofilne
rozcieńczenie	10³	10⁴
liczba kolonii	2	2
Liczebność bakterii po przeliczeniu w zależności od rozcieńczenia	2x10³x10	2x10⁴x10
Średnia wartość liczebności na 1 ml	[(2x10³x10)+(2x10⁴x10)]/2= [2x10(10³+10⁴)]/2= 10(10³+10⁴)= 110 000	[(11x10⁵x10)+(0x10⁶x10)]/2= [11(10⁵+0]/2= 550 000

Zestawienie oznaczenia miana i indeksu coli:

Indeks coli: indeks = $\frac{100}{\text{miano}}$

	miano	indeks
E.coli	10^-3	100/0,001=10⁵

Wyniki badań potwierdzających:

Zieleń brylantowa: w rozcieńczeniach 10^-1 pojawiło się zmętnienie, lekka zmiana zabarwienia oraz brak gazu w rurkach, natomiast dla 10^-2 brak zmętnienia, zmiany barwy i gazu
Podłoże Endo: wyrosły kolonie dla rozcieńczenia 10^-1 i 10^-2

Wnioski:

Bardzo wysoki indeks coli oraz miano, świadczą o dużym prawdopodobieństwie zanieczyszczenia wody bakteriami typu kałowego. Jednakże jak wykaże dalsza analiza wyników badań potwierdzających, nie ma pełnej pewności co do charakteru zanieczyszczeń bakteryjnych.
W badaniach potwierdzających na podłożu z zielenią brylantową nie zaobserwowano obecności gazu w rurkach Durhama, a zmętnienie pożywki było nieznaczne( nie zaszło na pełnej objętości roztworu). W konsekwencji niemożliwe jest jednoznaczne potwierdzenie obecności bakterii grupy coli w badanych preparatach.
Mała liczba wyrosłych koloni na podłożu Endo mimo iż daje wynik pozytywny, to po raz kolejny poddaje w wątpliwość wyniki badań wstępnych.
Wysoki stosunek bakterii psychrofilnych do mezofilnych świadczyć może o niskiej średniej dobowej temperaturze wody z której pobierana była próba.
Duże ilości bakterii mezofilnych i psychrofilnych (powyżej 100 000/cm3) świadczy że pod względem mikrobiologicznym woda z kłodnicy może służyć co najwyżej do celów przemysłowych oraz upraw rolnych.