MIKROBIOLOGIA ĆWICZENIA
Pobieranie materiału do badań biologicznych
Przestrzeganie aseptyki
Przechowywanie materiału, okres dostępu i sposób transportu: w temp. 37oC transportowana jest krew, płyn mózgowo-rdzeniowy oraz płyny z organizmu. Nie dłużej niż 2 godz. nie można przechowywać kału, moczu, wymazów, płynu mózgowo-rdzeniowego, materiału z cewników i drenów
Opis materiału
Odpowiednia objętość
Materiał pobieramy przed podaniem antybiotyku
W badaniach mikrobiologicznych krew posiewamy na trzy grupy tlenowce, beztlenowce i mikroarofilne. W badaniu serologicznym krew przechowywana jest 30-40 min. w temp. pokojowej a następnie ochładza się do badania. Krew pobierana jest przed szczytem gorączki a objętości przewidziane są normami. Stosunek krwi do pożywki 1:10, 1:20.
Badania w kierunku bakterii beztlenowych. Materiał pobieramy kiedy:
Umiejscowienie zakażenia w pobliżu błony śluzowej
Zakażenia po ugryzieniu
Objawy zgorzeli gazowej
Zapalenie osierdzia
Zakażenie połączone z nowotworowym przebiegiem choroby
Obecność cuchnącej wydzieliny
Czarno zabarwiona wydzielina zawierająca krew
Obecność „ziaren siarki” w wydzielinie
Niepowodzenia terapeutyczne związane z zastosowaniem aminoglikozydów na podstawie wyników wrażliwości izolowanych tlenowców
Biegunki polekowe
Pseudobłoniaste zapalenie jelit
Kliniczne objawy nasuwające myśli zakażenia z udziałem beztlenowców
Poroniena kliniczne
Zakażenia jako następstwo zabiegów chirurgicznych na przewodzie pokarmowym
Zakażenia po wprowadzeniu protezy
Ropnie zamknięte
Nawracające zakażenia
Przewlekłe zakażenia
Pobieranie materiału do badań wirusologicznych
Materiał pobieramy
We wczesnym stadium choroby
Do jałowego pojemnika lub na wymazówkę
Wymazy
W zbuforowanym roztworze NaCL z antybiotykami (penicylina, streptomycyna) i 1% albumina bydlęca
W płynie Hanksa z ww. dodatkami
Transport materiału w temp. 4oC a dłuższy w temp. -70oC : -20oC
Materiał do badań
Popłuczyny z gardła, wymaz zgardła, krew, kał, płyn mózgowo-rdzeniowy, treść ze zmian skórnych, wymazy z oka i odcisk rogówki.
Mocz pobieramy naczczo po nocy ze środkowego strumienia i należy umyć instrument. Z cewnika mocz pobierany jest zaraz po założeniu.
Kał pobierany jest do jałowych pojemników i nie podmywamy się. Wymaz kału pobierany jest z pojemnika.
Płyn mózgowo-rdzeniowy pobiera lekarz z zachowaniem aseptyki. Płyn posiewamy przy łóżku chorego i transportujemy w temp. 37oC. Prze pobierani płynu mózgowo-rdzeniowego pobieramy wymaz z oczu, uszu, gardła, krew, mocz.
Wymaz z gardła
Wypłukać jamę gardłową i pobrać z miejsca zmienionego chorobowo. Pobierać szpatułką i nie dotykać innych obszarów gardła. Nie pobiera się zwykłą wymazówką. W kierunku nosicielstwa wymaz pobierany jest na gronkowca.
Wymaz z nosa pobierany w kierunku nosicielstwa, gronkowca.
Wymaz z uszu, miejsce pobrania zdezynfekowane i pobieramy z obu uszu.
Przy wymazie z oczu nie należy używać wcześniej leków.
Materiał z drenów wprowadzany jest do jałowego pojemnika.
Plwocina pobierana jest naczczo do jałowego po przepłukanie jamy ustnej.
Wymaz z cewki moczowej, przegotowanie jak do cewnika.
Metody hodowli i identyfikacji bakterii
Metody charakterystyki drobnoustrojów
Metody mikroskopowe stwierdzamy czy to ziarenka, laseczki, pałeczki
Metoda izolacji na odpowiednich pożywkach (umożliwi wyizolowanie bakterii na pożywkach)
Metody immunologiczne i genetyczne skracają czas diagnostyki genetycznej
Metody biologiczne
Diagnostyka bakteriologiczna
Bakterioskopia wybarwianie metodą Gramma
Pożywki bakteriologiczne umożliwiają izolację drobnoustrojów z materiału klinicznego
Identyfikacja biochemiczna wykorzystuje właściwości biochemiczne drobnoustrojów
Identyfikacja serologiczna umożliwia podział na gatunki serologiczne metodą aglutynacji
Identyfikacja genetyczna
Właściwości podłoża
Odpowiednia zawartość substancji odżywczych
Odpowiednie pH
Klarowność
Jałowość
Odpowiednia temp. inkubacji
Podziały podłoży
Konsystencja
Płynne bulion mięsny, peptydowy, drożdżowy
Półpłynne agar 0.5-1%
Stałe zestalone agarem 1.5-3%
Zawartość substancji
Syntetyczne
Półsyntetyczne
Naturalne
Ilość i jakość składników odżywczych
Proste (podstawowe) agar zwykły
Złożone (wzbogacone) agar z krwią
Wybiórcze (selektywne) pożywka z centrymidem dla pałeczki ropy błękitnej, pożywka z meskaliną dla enterococcus
Wybiórczo namnażające bulion z żółcią dla salmonelli
Wybiórczo rozmnażające pożywka Chapmana dla staphylococcus (gronkowiec złocisty), pożywka MacConteya dla pałeczki
Specjalne pożywka Lowensteina-Jensena do hodowli prądków
Identyfikacja bakterii
Biochemiczna
Badanie jednej cechy (wytwarzanie katalazy, oksydazy)
Szeregi biochemiczne
Serologiczna
Wykrywane antygenów
Aglutynacja
Precypitacja
Metody znakowania
Genetyczna
Hybrydyzacja kwasów nukleinowych
Elektroforeza w zmiennym polu magnetycznym
Reakcja łańcuchowej polimeryzacji
Reakcja łańcuchowej liguazy