Przedmiot: Kultury tkankowe zwierzęce i roślinne
Semestr 7, Laboratorium
Ćwiczenie 3. Klonogenne systemy testowe - kontynuacja ćwiczenia nr 2. Liczenie kolonii
Jeżeli kolonie komórek posiewanych na drugim ćwiczeniu zostały już utrwalone i wybarwione wcześniej należy wyjąć płytki z chłodziarki i pozwolić na ogrzanie dla usunięcia pary, która może przeszkadzać w obserwacji, zwłaszcza mikroskopowej.
Jeżeli kolonie nie zostały jeszcze utrwalone i są ciągle w inkubacji, należy przerwać 2-tygodniową inkubację i przystąpić do utrwalania i barwienia zgodnie z procedurą opisaną w instrukcji do ćwiczenia 2.
Uwaga: utrwalanie i barwienie wykonujemy w laboratorium
BKiGO.
Po utrwaleniu, wybarwieniu i osuszeniu płytek można przystąpić do zliczania kolonii.
Liczyć widoczne makroskopowo kolonie, a w przypadkach wątpliwych oszacować ilość komórek w małej kolonii pod mikroskopem. Nie liczyć tzw. kolonii „poronnych”, zawierających mniej niż 50 komórek!
2. Do oceny w wątpliwych przypadkach można wykorzystać zwykłe mikroskopy stojące na sali ćwiczeń z BKiGO.
Opracować wyniki, zrobić wykres (zadanie domowe na ocenę). Korzystać z informacji podanych na wykładzie nr 3 i poniższych objaśnień.
Kalkulacja wyników
Wydajność posiewu PE (plating efficiency), w procentach:
PE (%) = Liczba kolonii na płytce/liczba komórek posianych x100
Frakcja przeżywająca (surviving fraction), SF; przyjmujemy, że wyliczona PE dla kontroli odpowiada SF = 1
Dla grup badanych SF wyrażona jest ułamkiem:
SFBadana = PE Badana /PE Kontrolna
1