CCF20081011010 (3)

Do wszystkich trzech probówek dodać 2 cm^J 10% NaOH i 2-3 krople 1% roztworu CUSO4. W obecności wiązań peptydowych pojawia się zabarwienie od różowego do fioletowego.

3. Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny.

Białka są jonami wielowartościowymi ze względu na obecność w nich licznych aminokwasów zawierających dysocjujące grupy, nie biorące udziału w wiązaniach peptydowych. W zależności od rodzaju aminokwasów i pH środowiska, cząsteczka białka może być wielo-wartościowym kationem lub anionem, względnie przy jednakowej ilości ładunków dodatnich i ujemnych - elektrycznie obojętna.

Taka wartość pH przy której cząsteczka białka jest elektrycznie obojętna nazywa się punktem izoelektrycznym. Ładunek elektryczny, którym obdarzone są cząsteczki białka, zapobiega koagulacji.Jeżeli ładunek ten zostanie usunięty (co ma miejsce w punkcie izoelektrycznym ) wówczas cząsteczki białka łączą się w większe skupiska (agregacja) i w konsekwencji mogą wypaść z roztworu (koagulacja).

Wykonanie:

Przygotować 7 suchych probówek i sporządzić w nich roztwory o różnym pH tzn. do

3    3

pierwszej probówki odmierzyć 3,2 cm 1 M CH3COOH i 6,8 cm wody, wymieszać. Do następnych probówek odmierzyć po 5 cm" wody. Z pierwszej probówki przenieść 5 cny’ roztwo-

O    _    _    o

ru do drugiej, a z niej po wymieszaniu 5 cm do trzeciej itd. Z ostatniej probówki odlać 5 cm . Do każdej probówki dodać po 1 cnT roztworu kazeiny, wymieszać. Obserwować stopień zmętnienia płynu w probówkach._

nr probówki	ilość CH3COOH	pH	zmętnienie
1	1,6	3,5
2	0.8	3,8
3	0,4	4,1
4	0,2	4,4
5	0,1	4,7
6	0,05	5,0
7	0,025	5,3

4. Wytracanie białka z roztworu i badanie je«o aktywności biologicznej.

Wytrącanie białka może być spowodowane różnymi czynnikami chemicznymi lub fizycznymi ( podwyższona temperatura, zmiana pH. sole metali ciężkich, sole metali alkalicznych). W zależności od rodzaju czynnika rozróżnia się wytrącanie związane z denaturacją i z wysalaniem. Denaturację określa się jako przemianę związaną ze zniszczeniem wtórnej struktury białka, a więc białko zdenaturowane traci swoją aktywność biologiczną. Denaturację powodują takie czynniki jak: ogrzew'anie, napromieniowanie, znaczne zmiany pH, duże stężenie soli metali ciężkich, długotrwałe działanie alkoholem.

W przeciwieństwie do denaturacji, wysalanie jest procesem w pełni odwracalnym. gdvż dodatek odpowiedniej ilości wody powoduje ponowne rozpuszczenie wytrąconego białka. Wysalanie przebiega pod działaniem wyższych stężeń soli metali alkalicznych lub soli amonowych. Białka wytrącone tym sposobem zachowują w pełni swnje właściwości biologiczne.

Wykonanie

4