CCF20081011010

Do wszystkich trzech probówek dodać 2 cnr¹ 10% NaOH i 2-3 krople 1 % roztworu CuSC>4. W obecności wiązań peptydowych pojawia się zabarwienie od różowego do fioletowego.

3. Wyznaczanie punktu izoelektrycznego kazeiny.

Białka są jonami wielowartościowymi ze względu na obecność w nich licznych aminokwasów zawierających dysocjujące grupy, nie biorące udziału w wiązaniach peptydowych. W zależności od rodzaju aminokwasów i pH środowiska, cząsteczka białka może być wielo-wartościowym kationem lub anionem, względnie przy jednakowej ilości ładunków dodatnich i ujemnych - elektrycznie obojętna.

Taka wartość pH przy której cząsteczka białka jest elektrycznie obojętna nazywa się punktem izoelektrycznym. Ładunek elektryczny, którym obdarzone są cząsteczki białka, zapobiega koagulacji.Jeżeli ładunek ten zostanie usunięty (co ma miejsce w punkcie izoelektrycznym ) wówczas cząsteczki białka łączą się w większe skupiska (agregacja) i w konsekwencji mogą wypaść z roztworu (koagulacja).

Wykonanie:

Przygotować 7 suchych probówek i sporządzić w nich roztwory¹ o różnym pH tzn. do

pierwszej probówki odmierzyć 3,2 cm'’ 1 M CH3COOH i 6.8 cnT wody, wymieszać. Do na-

* *> _ ^

stępnych probówek odmierzyć po 5 cm^J wody. Z pierwszej probówki przenieść 5 cnr^{2 3 4} roztworu do drugiej, a z niej po wymieszaniu 5 cnT do trzeciej itd. Z ostatniej probówki odlać 5 cnT. Do każdej probówki dodać po 1 cnT roztworu kazeiny, wymieszać. Obserwować stopień zmętnienia płynu w probówkach._

nr probówki	ilość CH3COOH		pH	zmętnienie
1	1,6		3,5
2	0.8		3,8
D	0,4		4,1
4	0,2		4,4
5	0,1		4,7
6	0,05		5,0
7	0.025		5,3

4

1

Wykonunie

2

Wytracanie białka z roztworu i badanie jeuo aktywności biologicznej.

3

Wytrącanie białka może być spowodowane różnymi czynnikami chemicznymi lub fizycznymi ( podwyższona temperatura, zmiana pH. sole metali ciężkich, sole metali alkalicznych). W zależności od rodzaju czynnika rozróżnia się wytrącanie związane z denaturacją i z wydalaniem. Dcnaturację określa się jako przemianę związaną ze zniszczeniem wtórnej struktury białka, a więc białko zdenaturowane traci swoją aktywność biologiczną. Dcnaturację powodują takie czynniki jak: ogrzewanie, napromieniowanie, znaczne zmiany pH, duże stężenie soli metali ciężkich, długotrwałe działanie alkoholem.

4

W przeciwieństwie do denaluracji. wysalanie jest procesem w pełni odwracalnym. gdyż dodatek odpowiedniej ilości wody powoduje ponowne rozpuszczenie wytrąconego białka. Wysalanie przebiega pod działaniem wyższych stężeń soli metali alkalicznych lub soli amonowych. Białka wytrącone tym sposobem zachowują w pełni sw'oje właściwości biologiczne.