75581

Metody ilościowego oznaczania białek

•    Metoda Kjeldahla- oznaczanie azotu białkowego

Zawartość azotu w różnych białkach jest względnie stała i wynosi ok. 16%.

Znając odsetek azotu w badanej próbie, można obliczyć, ile zawiera białka

•    Metoda pomiaru absorbancji w UV

•    Metoda biuretowa(Piotrowskiego)

Oznaczanie natężenia barwy powstałej w wyniku utworzenia związków kompleksowych białek z jonami miedzi (II) w środowisku zasadowym. Intensywnośd barwy w reakcji biuretowej jest proprocjonalna do liczby wiązao peptydowych. Aby ilościowy oznaczyć białko wykorzystuje się linowa zależność zmiany barwy od zawartości protein

•    Metoda mikrobiuretowa

Podobna do biuretowej, rożni się dłg fal

•    Metoda Lowrey'ego

Wykorzystuje się dwie rekacje:

1) Reakcję aminokwasów z odczynnikiem Folina:

Tyrozyna.tryptofan.cysteina oraz przypuszczalnie histydyna występujące w białkach redukują jony M06+ /W6+zawarte w odczynniku Folina-Ciocalteau do niższych tlenków.

( Gdy zmierzymy ile zostało zredukowanych jonow to bd wiedzieć ile było białka—chyba)

2)    Reakcję biuretową:

Jony miedzi(ll) tworzą kompleksowe połączenia z wiązaniami peptydowymi,uczestniczą również w redukcji odczynnika Folina.przez co zwiększa się czułość reakcji

•    Metoda Bradforda

W metodzie wykorzystuje się zdolność wiązania barwnika błękitu brylantowego -coomassie Brilliant Blue G-250 (CBB G250) z grupami aminowymi białek. Natezenie barwy jest proporcjonalne do ilości białek w roztworze

•    Metoda z kwasem bis-cynchoninowym (BCA)

W alkalicznym środowisku niektóre składniki białek (tyrozyna, tryptofan. cysteina, cystyna) redukują jony Cu2+ do Cul+

•    Cul+ tworzą barwny kompleksowy związek z kwasem biscynchoninowym (BCA)