CCF20121026001

2. Ilościowe oznaczanie białka w surowicy krwi metodą biuretową

Zasada oznaczenia polega natworzeniu połączeń kompleksowych białka z jonami miedzi. Powstaje niebiesko-fioletowe zabarwienie, którego intensywność zależy od stężenia białka w roztworze.

Odczynniki: odczynnik biuretowy (alkaliczny roztwór siarczanu miedzi w winianie sodowo-potasowym) roztwór standardowy (0,5 g albuminy wołowej w 100 ml H2O) surowica krwi Wykonanie analizy:

Krzywa standardowa Do kolejnych probówek odmierzyć:

4 ml H2O = 0,1 g/ 100 ml standardu 3 ml H2O = 0,2 g/100 ml standardu 2 ml H2O = 0,3 g /100 ml standardu 1 ml H2O = 0,4 g/100 ml standardu 0    = 0,5 g/ 100 ml standardu

Wymieszać i pobrać z każdej próbki po 3 ml rozcieńczonego roztworu standardu do kolejnych probówek, dodać 3 ml odczynnika biuretowego i wstawić do łaźni wodnej 37°C na 30 min

Próba ślepa ódczynnikowa:

3 ml H₂0 + 3 ml odczynnika biuretowego i wstawi do łaźni 37°C na 30 min

+

+

+

+

+

1.    1 ml roztworu standardu albuminy

2.    2 ml

3.    3 ml

4.    4 ml

5.    5 ml

Oznaczenie próbki

2,85 ml H2O + 0,15 ml surowicy + 3 ml odczynnika biuretowego i wstawi do łaźni 37°C na 30 min

Po 30 min zmierzyć absorbancję próbek wobec próby ślepej odczynnikowej przy długości fali 540 nm. Na papierze milimetrowym wykreślić krzywą wzorcową zależności absorbancji od ilości białka w próbkach. Z krzywej odczytać wartości stężenia białka w badanych próbkach surowicy. Wyniki podać w g białka /100 ml surowicy.

23