plik


ÿþKINETYKA WZROSTU DROBNOUSTROJÓW Krzysztof W. Szewczyk WZROST DROBNOUSTROJÓW 30 Hamowanie Faza wzrostu 25 stacjonarna 20 Wzrost wykBadniczy 15 10 Przyspieszenie Faza wzrostu adaptacji 5 0 0246810 12 CZAS BIOMASA WAAZCIWA SZYBKOZ WZROSTU 1 d mX µ = mX = mX ,0 eµt mX d t mX ,2 ln ln2 0,693 mX ,1 tD = = t = µ µ µ WZROST DROBNOUSTROJÓW POPULACJA DROBNOUSTROJÓW -wieloskBadnikowa -niejednorodna -hierarchiczny zbiór reakcji -sterowanie wewntrzne -zdolno[ do adaptacji -zachowania stochastyczne -dryf genetyczny MODELE WZROSTU Niestrukturalne Strukturalne Jednorodna WieloskBadnikowa Niesegregowane [rednia komórka biomasa Populacja Populacja Segregowane komórek reaktorów MODELE NIESTRUKTURALNE  czarna skrzynka x 1 d mX µ = = f (CS ,CP,CX , pH ,T...) mX dt MODEL MONOD µm CS µ = KS + CS 1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 5 10 15 20 25 30 Cs µ WYKRES LINAWEAVERA-BURKA 1 KS 1 1 = + µ µm CS µm 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0 02468 10 12 1/Cs µ 1/ WYKRES HOFSTEE EGO µ µ = µm - KS CS 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 /Cs µ µ REAKCJE SZEREGOWE S M1 M2 . . . Mi . . . ( ) rX = min ri MODEL BLACKMANA µ = k CS CS d" CS ,gr µ = µm CS > CS ,gr CS µ HAMOWANIE SUBSTRATEM Równanie µm CS µ = Andrewsa 2 CS KS + CS + KI CS µ HAMOWANIE PRODUKTEM µm CS 1 µ = CP KS + CS 1 + KP ëø µm CS ìø1 CP öø ÷ø µ = - CP d" CP,max KS + CS ìø CP,max ÷ø íø øø µ = 0 CP > CP,max WZROST LIMITOWANY DWOMA SUBSTRATAMI CS CO µ = µm KS + CS KO + CO PRODUKTY METABOLIZMU KoDcowe produkty katabolizmu d CP 1 d CX = + mP CX * d t YPX d t Metabolity po[rednie d CP d CX = ± + ² CX d t d t PRODUKTY METABOLIZMU d CP Metabolity wtórne = ± CX d t X P1 P2 P3 MODELE STRUKTURALNE  szara skrzynka Model Williamsa d x1 S ’! X1 = a11 k1 CS - k2 x1 x2 - µ x1 d t d x2 X1 ’! X2 = a22 k2 x1 x2 - µ x2 d t MODEL STRUKTURALNY przykBad S X1 P X2 M WZROST NIEUSTALONY S µ CZAS S µ C , IN{YNIERIA METABOLIZMU Krzysztof W. Szewczyk IN{YNIERIA METABOLIZMU Polepszanie aktywno[ci komórek w wyniku zmiany funkcji enzymatycznych, transportowych i regulacyjnych za pomoc techniki rekombinacji DNA J.E.Bailey, Science 1991 INTERDYSCYPLINARNOZ biologia molekularna in|ynieria biochemia reakcji IN{YNIERIA chemicznych METABOLIZMU chemia fizjologia analityczna komórek IN{YNIERIA METABOLIZMU SYNTEZA konstrukcja rekombinowanego szczepu PROJEKTOWANIE ANALIZA przyszBe modyfikacje charakterystyka metabolizmu Fizjologia Analiza ekspresji genów Analiza szlaków metabolicznych Analiza biaBek Analiza metabolitów Analiza strumieni ANALIZA SZLAKÓW METABOLICZNYCH Metabolic Flux Analysis MFA " identyfikacja struktury sieci metabolicznej (topologia szlaków metabolicznych) " kwantyfikacja strumieni metabolicznych " identyfikacja struktury sterowania w sieci metabolicznej ZASTOSOWANIA ME " Wytwarzanie biaBek heterologicznych " Tworzenie szlaków do nowych produktów " Degradacja ksenobiotyków " Ulepszanie fizjologii komórek " Eliminacja wytwarzania produktów ubocznych " Zwikszanie wydajno[ci lub produkcyjno[ci MODEL METABOLIZMU q2 r4 r5 r1 r3 q3 q1 r2 r8 r7 r6 r9 q4 BILANS STRUMIENI stan ustalony qP1 r2 M3 P1 qS M1 S r3 qP2 r1 M2 P2 - r1 - r2 + 0 r3 + qS = 0 -1 -1 0 r1 - qS îø ùø îø ùø îø ùø ïø úø ïør úø ïø r1 + 0 r2 + r3  qP2 = 0 1 0 1 = qP2 úø 2 ïø úø ïø úø ïø úø 0 r1 + r2 - r3  qP1 = 0 ïø úø ïø úø ïø úø 0 1 -1ûø ðør3 ûø qP1 ûø ðø ðø Zagadnienia " Dane S obliczy P1 i P2 " Jak zmieni strumienie r1, r2, r3 aby maksymalizowa P1 " Jaka jest mo|liwa maksymalna wydajno[ P1 MODEL STECHIOMETRYCZNY R M  liczba metabolitów "n ri = q1 1,i R  liczba reakcji i=1 R "n ri = q2 2,i i=1 . . . R "n ri = qM 1,M i=1 MODEL Saccharomyces cerevisiae 1212 reakcji 131 reakcji w mitochodriach 725 reakcji w cytoplazmie 356 reakcji transportowych 732 metabolity wewntrzkomórkowe 166 w mitochondriach 566 w cytoplazmie 122 metabolity zewntrzkomórkowe Förster Jochen, ESBES-4, 2002 Center for Bioprocess Biotechnology, Dania MODELE STECHIOMETRYCZNE stan pseudo-ustalony r v N × r = q n11 n1,R îø ùø metabolity ïø úø ïø úø N = ïø úø (1 . . . M) ïø úø nM ,R úø ïøn M ,1 ðø ûø reakcje (1 . . . R) R > M ukBad niedookre[lony Analiza strumieni metabolicznych Metabolic Flux Analysis (MFA) " Identyfikacja sztywnych rozgaBzieD szlaków metabolicznych " Identyfikacja wystpowania ró|nych szlaków metabolicznych " Obliczanie niemierzalnych strumieni zewntrznych " WpByw alternatywnych szlaków metabolicznych na rozkBad strumieni " Obliczanie maksymalnych wydajno[ci teoretycznych BILANS ENERGETYCZNY biomasa ATP S NADH P O2 PROGRAMOWANIE LINIOWE r v min c × r = min ( "c ri ) i r r v wobec N× r = q " maksymalna szybko[ wzrostu " maksymalna szybko[ tworzenia produktu " minimalna produkcja ATP przy zadanym strumieniu substratu FENOTYP METABOLICZNY r1 r2 r3 r1 r2 r3 r3 r1 r2 r1 r2 r3 r3 r1 ANALIZA STRUMIENI WGLA izotop + izomer = izotopomer v (v v ) f v , yimp = qimp ANALIZA NMR ANALIZA NMR C-13 substrat znakowany eksperyment widmo in-vivo zmierzone porównanie symulacja widmo cyfrowa z symulacji dopasowanie zaBo|one strumienie MFA Corynebacterium glutaminicum Marx at al.. Biotechnol.Bioneng. 1996 GLUKOZA 67 100 1 Rybulozo-5-P Glukozo-6-P 11 32 56 Fruktozo-6-P 7 BIOMASA CO2 Aldehyd 3-P-glicerynowy 11 81 19 22 21 Pirogronian 18 6 9 24 szczawiooctan CO2 3 12 CO2 14 18 LIZYNA BIOMASA ANALIZA REGULACJI METABOLIZMU Metabolic Control Analysis (MCA) wspóBczynniki elastyczno[ci wspóBczynniki regulacji FCC Ej d ri X d ri j CiJ = µiJ = , j , j ri d Ej ri d X j CCC Ej d Xi CiX = , j Xi d Ej TWIERDZENIA MCA Kacser, Burns 1973 Ej dri = 1 " ri dEj j Ej d Xi = 0 " Xi d Ej j ZaBo|enia MCA " pojedynczy stan ustalony " st|enia metabolitów i szybko[ci reakcji s funkcj jedynie st|enia enzymów " ukBad homogeniczny OBLICZANIE WSPÓACZYNNIKÓW REGULACJI " pomiary bezpo[rednie  manipulacje genetyczne  dozowanie enzymów  dozowanie inhibitorów " obliczenia po[rednie  na podstawie wyznaczonych wspóBczynników elastyczno[ci " pomiary stanów niestacjonarnych MODELE KINETYCZNE stan ustalony r r v r r v 0 = N × r(± , E, S, X) - q - X µ MODELE NIESTACJONARNE CS t MeOH - 40 oC v r r v r r d X v = N × r (±, E, S, X) - q - µ X d t REGULACJA METABOLICZNA AMP + ATP ’! 2 ADP ATP ’! ADP GG6P 2 3PG 2 PEP 2 EtOH F6P PdP GRO POL [F6P] [AMP] rF 6P = rm KS ,F 6P + [F6P] KAMP + [AMP] REGULACJA PROCESÓW WEWNTRZKOMÓRKOWYCH REGULACJA GENETYCZNA 103  108 s synteza enzymów REGULACJA METABOLICZNA 10-5  102 s kontrola enzymatyczna st|enia METABOLIZM metabolitów Zadania " Zadanie 3.1.  WBa[ciw szybko[ wzrostu Pseudomonas putida na fenolu mo|na opisa równaniem Andrewsa z parametrami: µm = 0,3 h-1, KS = 50 mg/dm3, Ki = 120 mg/dm3. Obliczy najwiksz wBa[ciw szybko[ wzrostu bakterii oraz odpowiadajce jej st|enie fenolu. " Zadanie 3.2.  Kinetyk wzrostu bakterii na octanie sodowym mo|na opisa równaniem Monoda z parametrami: µm = 0,45 h-1, KS = 0,5 g/dm3. WspóBczynnik wydajno[ci biomasy wzgldem substratu wynosi 0,55g/g. Obliczy szybko[ zu|ywania tlenu w hodowli je|eli st|enie octanu wynosi 2 g/dm3, za[ st|enie biomasy 10 g/dm3. Wykaz oznaczeD " C  st|enie  CS  st|enie substratu  CO  st|enie rozpuszczonego tlenu  CP  st|enie produktu  CX  st|enie biomasy " CJi,j  wspóBczynnik regulacji strumienia " CXi,j  wspóBczynnik regulacji st|enia " Ej  aktywno[ j-tego enzymu " KS  staBa nasycenia " KI  staBa inhibicji " mX  masa drobnoustrojów " ni,j  wspóBczynnik stechiometryczny " N  macierz wspóBczynników stechiometrycznych " qi  i-ty strumieD zewntrzny " ri  szybko[ i-tej reakcji metabolicznej (strumieD metaboliczny) " tD  czas podwojenia biomasy " Xi  i-ty metabolit " µ - wBa[ciwa szybko[ wzrostu " µJi,j  wspóBczynnik elastyczno[ci

Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
wyklad 3 KINETYKA REAKCJI ENZYMATYCZNYCH
wyklad 2 BILANSE WZROSTU DROBNOUSTROJÓW
wyklad 1 BILANSE WZROSTU DROBNOUSTROJÓW
wykład VIII wzrost gospodarczy
Wykład 5 Wzrost gospodarczy
wyklad wzrost (2)
Ekonomia pracy wykład wzrost zatrudnienia, reforma emerytalna(2)
Demografia mod wzrostu Wyklad 4
kinetyka wykład2
29 04 & 06 05 & 13 05 2009, wykład, Wzrost, różnicowanie i starzenie się komórek Paul Esz
Sieci komputerowe wyklady dr Furtak
Wykład 05 Opadanie i fluidyzacja

więcej podobnych podstron