8197955611

272 femes J. Scientifigues du Reseau Biotechnologies Yćgetales AUPELF.UREF, Orsay, juillet 1997

plantes ont ete cultivees sur melange de terre a 5 ou 10°C, durant 3, 6 ou 9 jours (Bertin et al., 1996). Les observations ont ete realisees apres differentes durees d'exposition au stress.

Sur base de differents tests de resistance et de tests d'aptitude a la culture in vitro. plusieurs varietes ont ete retenues de faęon a representer un eventail suffisamment large quant a leur resistance au stress considere.

Les varietes dont il sera question dans cet article sont Aiwu et IRól 15-6-1 pour I'etude de la resistance a 1'aluminium, I Kong Pao, Aiwu et IR2153 dans le cas de la salinite. Facagro 57. Facagro 76, Kirundo 3 et Kirundo 9 pour l'etude des basses temperatures.

Techniques de culture et de selection in vitro

Des cals ont ete produits au depart d'embryons matures et cultives a 25°C a 1'obscurite sur milieu LS (Linsmaier et Skoog, 1965) additionne de 0,5 mg L'¹ 2.4-D. 1 mg L'¹ ANA, 1 mg L'¹ BA, 30 g L'¹ saccharose et 2.5 ou 4 g L'¹ Gelrite™, a pH 5.7. Apres 4 semaines de callogenese en 1'absence de stress. les cals ont ete subcultives soit en conditions de selection in vitro, soit en 1'absence de stress. Dans le cas de la selection pour la tolerance a 1'aluminium, le pH et la composition minerale du milieu ont ete modifies, afin de permettre une meilleure expression de la toxicite aluminique (Van Sint Jan et al., 1997). L'aluminium a ete ajoute au milieu de culture a des concentrations variant de 250 a 2500 patg L'¹. La duree de culture etait de 20 semaines. Pour la resistance a la salinite, les doses de NaCl ajoutees au milieu LS etaient comprises entre 50 et 350 mM, et les durees de culture entre 2 et 6 mois (Lutts. 1996). Pour la resistance aux basses temperatures, le milieu LS est reste inchange et les cals ont ete cultives a 4°C durant 2 a 6 semaines (Bertin et al.. 1995).

Les cals ont ensuite ete places sur milieu de regeneration de plantes (mineraux de LS a mi-concentration, additionnes de 0,01 mg L'¹ 2,4-D, 1 mg L'¹ ANA, 1 mg L'¹ BA. 20 g L’¹ saccharose et 4 g L'¹ Gelrite™, a pH 5,7), en presence de lumiere et a 25°C. Les cals porteurs de plantules regenerees (R₀) ont alors ete places sur milieu de developpement racinaire (mineraux de LS additionnes de 1 mg L'¹ Al A. 30 g L'¹ saccharose et 4 g L‘‘ Gelrite™, a pH 5,7), en presence de lumiere et a 25°C.

Acclimatation et criblage des vitro-plants

Les plantules ont ćtć acclimatees en serre et le criblage des plantes a eu lieu en conditions de stress pendant une ou plusieurs generations. Pour chaque stress. la procedurę de criblage la plus discriminante parmi celles testees au niveau varietal a ete retenue. Le criblage pour la resistance a 1'aluminium est realise par culture en presence de 1500 |iatg L'¹ de Al pendant 80 jours, au depart de 63 plantes regenerees pendant 4 generations successives. Pour la salinite, une methodologie similaire est suivie. 154 familles R, etant mises en presence de 30 mM de NaCl pendant 21 jours. Pour les basses temperatures, environ 4000 vitro-plants R| ont ete cribles a 5°C pendant 5 jours pour la variete la plus tolerante aux basses temperatures, a 10°C pendant 9 et 6 jours. respectivement pour la variete intermediaire et pour les varietes les plus sensibles ; les descendances des survivants ont ete testees jusqu’en R₃. Les resultats des selections ainsi operees ont ete compares aux resultats d'une selection massale realisee sur les varietes de depart. En outre, d'autres vitro-plants ont ćte testes pour leur tolerance aux basses temperatures par culture en altitude au Burundi (de 800 a 1950 m) pendant deux generations (Bertin et al., 1996b, 1997b).