METODY

IMMUNOLOGICZNE

P r z e c i w c i a ł a



Przeciwciałami nazywa się
białka

wydzielane

przez

komórki plazmatyczne (czyli
pobudzone

limfocyty

B

)

w

przebiegu

odpowiedzi

immunologicznej

typu

humoralnego

,

które mają

zdolność

do

swoistego

rozpoznawania

antygenów

.

Rozpoznawanie obcy-

swój, obrona przed bakteriami, wirusami i pasożytami

Podstawowe pojęcia dotyczące

przeciwciał



Przeciwciało



Antygen



Epitop

(determinanta antygenowa)

Pięć klas immunoglobulin



IgA

Odgrywają rolę w mechanizmach odpornościowych w

obrębie błon śluzowych przewodu pokarmowego, dróg

oddechowych, układu moczowo-płciowego, zapobiegają

kolonizacji patogenów



IgD

Działanie niezbyt dokładnie zbadane. Odgrywają rolę jako

receptory na komórkach B dla antygenów



IgE

Odpowiedzialne za reakcje alergiczne typu

natychmiastowego. Powodują uwalnianie histaminy z

mastocytów. Odgrywają rolę w zwalczaniu pasożytów



.



IgG

Podstawowa w odporności klasa immunoglobulin



IgM

Wydzielane wcześnie w przebiegu reakcji immunologicznej.

Eliminują patogeny we wczesnych stadiach odporności zależnej

od limfocytów B, zanim zostaną wyprodukowane wystarczające

ilości IgG Monomeryczna forma IgM znajdująca się na

powierzchni limfocytów B pełni rolę receptora dla antygenów.

Budowa przeciwciał

Różnorodność przeciwciał

V - 65
D - 27
J - 6

Produkcja przeciwciał

monoklonalnych

Wykorzystanie przeciwciał

monoklonalnych

Zastosowanie przeciwciał

- Medycyna

- diagnostyka

(np. wirus Epstein-Barr)

- terapia

(reumatoidalne zapalenie stawów, stwardnienie rozsiane, nowotwory)

- terapia prenatalna

(czynnik Rh)

- Badania naukowe

Aglutynacja



Wykrywanie antygenów eksponowanych na powierzchini
bakterii i komórek eukariotcznych.

Precypitacja

Reakcja precypitacji zachodzi wtedy, gdy antygen występuje w

formie rozpuszczalnej. Wielowartościowe przeciwciała i antygeny
tworzą agregaty w postaci siatki, które to ze względu na swą
wielkość wypadają z roztworu w postaci precypitatu

ELISA

(enzyme-linked immunosorbent assay)

ELISA jest jednym z podstawowych narzędzi immunologii klinicznej.
Oparta na interakcji przeciwciało-antygen pozwala na łatwą wizualizację
wyników bez użycia substancji radioaktywnych

ELISA

Wykrywanie swoistych przeciwciał

ELISA

Wykrywanie antygenów – „sandwich” ELISA

ELISA

test bezpośredni i pośredni

Western blot

Folkers

Immunofluorescencja

Immunohistochemia

Immunohistochemia (IHC) umożliwia lokalizowanie białek w komórkach tkanki,
wykorzystując wiązanie się przeciwciał do specyficznych dla nich antygenów.
Znakowanie immunohistochemiczne jest powszechnie stosowane w
diagnozowaniu np. komórek nowotworowych. IHC wykorzystywane jest również
w badaniach naukowych, do badania lokalizacji i dystrybucji biomarkerów.

Cytometria przepływowa



Jednoczesny pomiar wielu cech
pojedynczej komórki



Analizowanych może być nawet
kilkadziesiąt tysięcy komórek na sekundę

Co cytometria powie nam o

komórce?



Rozmiar (Forward Scatter

—FSC)



Granularność (Side Scatter—SSC)



Intensywność fluorescencji
(FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)

Rozmiar (Forward Scatter

—FSC)

Granularność (Side Scatter—SSC)
Intensywność fluorescencji
(FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)

Right Angle Light Detector

Cell Complexity

Forward Light Detector

Cell Surface Area

Incident

Light

Source

= 488 nm

Emitted

Fluorescent Light

Energy

Antibody

Incident

Light Energy

Fluorescein

Molecule

530 nm

HO

CO

2

H

O

C

Znakowanie dwukolorowe

Analyze

Wash

Incubate

Two-Color Cell Analysis

CD

19

PE

CD3 FITC

10

0

10

0

10

1

10

2

10

3

10

4

10

1

10

2

10

3

10

4