METODY IZOLACJI IMMUNOGLOBULIN
Izolacja IgM z surowicy metoda sączenia molekularnego
odczynniki, materiał biologiczny:
Sephadex G-200 (G-150)- produkt handlowy: Pharmacia, Szwecja
bufor Tris-HCl 0,2 M zawierający 0,15 M NaCl, ph= 8,0 lub roztwór PBS
blue dextran
Opis metody:
wypełnić kolumnę napęczniałym i „zrównoważonym” żelem
przemyć wypełnienie w kolumnie buforem, stosując wysokość słupa hydrostatycznego 6-10 cm. Wyższe ciśnienie spowoduje sprasowanie żelu i zmniejszenie szybkości przepływu buforu (szybkość przepływu buforu przez kolumnę nie większa niż 0,25 ml/min.)
określić objętość „pustą” kolumny za pomocą roztworu blue dextran
nanieść na kolumnę surowicę (ilość nie powinna przekraczać 5% objętości „pustej”
kolumny), prowadzić rozdział z szybkością przepływu eluentu do 0,25 ml/min., frakcje zbierać do szeregu ponumerowanych, wyskalowanych probówek w ilości 0,25 ml
określić wartość absorbancji poszczególnych frakcji metodą spektrofotometryczną przy długości fali charakterystycznej dla białek
wyniki przedstawić w postaci wykresu A=f (nr frakcji)